脑脊液外泌体miRNA分析

检测项目

外泌体分离：

• 离心纯化：回收率≥95%，粒径分布100-150nm（参照ISO22412）
• 超滤法：孔径0.1μm，流速控制1ml/min±0.1ml/min

• 试剂盒提取：纯度A260/A280≥1.8，浓度检测限0.1ng/μl
• 柱纯化：结合效率≥90%，洗脱体积20μl±2μl

• 完整性检测：RNA完整性数≥7.0，降解率≤5%
• 浓度测定：误差±0.5%，线性范围0.1-1000ng/μl

• RT-qPCR：Ct值变异系数≤2%，引物特异性≥95%
• 数字PCR：绝对定量精度±0.1拷贝/μl，检测限1拷贝

• 高通量测序：读长≥50bp，错误率≤0.1%
• Sanger测序：准确率≥99.9%，覆盖深度≥30x

• 差异表达：倍数变化≥2.0，p值≤0.05
• 靶基因预测：敏感度≥90%，特异度≥85%

• 污染物检测：蛋白质残留≤0.1μg/ml，DNA杂质≤0.01ng/μl
• 外泌体标记物：CD63阳性率≥90%，TSG101表达量（参照ISO20186）

• 分光光度法：吸光度线性R²≥0.99，波长260nm
• 荧光法：动态范围0.1-1000nM，猝灭率≤5%

• 冷冻保存：活性保留率≥85%at-80°C，时间≥6个月
• 室温稳定性：降解速率≤1%/hour，pH7.4±0.2

• 细胞转染效率：转染率≥70%，毒性≤10%
• 生物标志物关联：相关系数≥0.8，临床相关性分析

检测范围

1.脑脊液临床样本：新鲜或冷冻保存样本，重点检测外泌体浓度和miRNA表达差异

2.神经元细胞培养上清：神经元来源外泌体，侧重纯度和miRNA稳定性分析

3.脑肿瘤组织来源外泌体：胶质瘤或脑膜瘤样本，检测miRNA标志物特异性和定量精度

4.阿尔茨海默症模型样本：疾病模型脑脊液，重点分析miRNA差异表达和生物信息学预测

5.帕金森病样本：患者临床样本，侧重于miRNA序列变异和功能性验证

6.中风后脑脊液：急性期或恢复期样本，检测外泌体回收率和miRNA动态变化

7.神经炎症样本：炎症因子影响样本，分析miRNA浓度波动和纯度评估

8.儿科神经疾病样本：儿童脑脊液，重点检测低浓度miRNA提取和稳定性

9.冷冻保存样本：-80°C长期保存样本，侧重活性保留率和降解率检测

10.新鲜采集样本：实时处理样本，检测miRNA即时表达谱和外泌体完整性

检测方法

国际标准：

• ISO22412:2017纳米粒子粒径分布分析
• ISO20186:2019分子诊断样本预处理规范
• ASTME2880-12核酸提取和纯化方法

• GB/T37871-2019外泌体分离和检测技术要求
• GB/T34796-2017微小RNA定量分析标准
• GB/T35823-2018生物样本稳定性和保存规范

检测设备

1.超速离心机：OptimaXPN-100型（最大转速100,000rpm，温度控制±2°C）

2.纳米粒子追踪分析仪：NanoSightNS300型（粒径检测范围10-2000nm，精度±5nm）

3.实时荧光定量PCR仪：QuantStudio7Pro型（热循环精度±0.1°C，多通道检测）

4.高通量测序仪：NovaSeq6000型（通量达20Gb/run，错误率≤0.1%）

5.分光光度计：NanoDropOneC型（波长范围190-840nm，检测限0.1ng/μl）

6.电泳系统：Bio-RadMini-PROTEAN型（电压范围50-300V，分辨率0.1kb）

7.荧光显微镜：OlympusIX83型（放大倍数40-1000x，激发波长488nm）

8.恒温混匀器：ThermoMixerC型（温度范围4-100°C，转速100-1500rpm）

9.生物安全柜：LabGardES型（气流速度0.5m/s，HEPA过滤效率99.99%）

10.液氮罐：CryoStarXC型（容量50-500L，温度维持-196°C）

11.数据服务器：DellPowerEdgeR740型（处理器32核，存储容量100TB）

12.样本制备工作站：HamiltonSTARlet型（移液精度±0.5μl，自动化处理）

13.冷冻干燥机：ChristAlpha1-4型（真空度0.1mbar，干燥时间≤24h）

14.振荡培养箱：NewBrunswickInnova型（温度控制±0.5°C，振荡频率50-400rpm）

15.紫外分光仪：AgilentCary60型（扫描速度2400nm/min，带宽1.5nm）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"脑脊液外泌体miRNA分析"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。