检测项目
细胞准备检测:
- 细胞活性检测:活性≥95%(参照ISO10993-5)
- 细胞计数精度:误差≤2%
- 细胞悬浮均匀性:变异系数≤5%
- RNA完整性检测:RIN值≥7.0
- RNA浓度精度:偏差±5%
- 降解产物控制:降解率≤3%
- RNA捕获率检测:捕获率≥85%
- 基因检出数检测:检出基因≥2000个
- 低丰度基因灵敏度:检出限≤0.1拷贝/细胞
- 测序深度检测:平均深度≥50,000reads/cell
- 映射率检测:映射率≥90%
- 重复序列控制:重复率≤10%
- 测序错误率检测:错误率≤0.1%
- Q30比例检测:Q30≥85%
- 背景噪音评估:信噪比≥20:1
- 差异表达基因检出:FDR≤0.05
- 聚类分辨率检测:轮廓系数≥0.5
- 批次效应控制:相关系数≥0.95
- 逆转录效率检测:cDNA产量≥50ng
- 扩增偏差评估:变异系数≤10%
- 酶活性稳定性:半衰期≥24小时
- 温度控制精度:±0.5°C
- 流量误差检测:误差≤1%
- 光学系统校准:分辨率误差≤0.1μm
- 冻存复苏活性:恢复率≥80%
- RNA稳定性检测:降解率≤10%/月
- 长期储存条件:温度波动±1°C
- 总捕获效率评估:综合捕获率≥75%
- 流程稳定性检测:标准差≤5%
- 成本效率优化:试剂消耗降低≥20%
检测范围
1.人类外周血单核细胞:重点检测低丰度基因捕获效率和批次间变异控制,确保免疫细胞亚群分辨率。
2.小鼠脑组织神经元:侧重异质性细胞群体中的捕获均匀性和长转录本检测,优化神经退行性疾病模型。
3.癌细胞系样本:检测高变异肿瘤细胞中的RNA捕获稳定性和基因表达保真度,支持癌症机制研究。
4.干细胞样本:关注多能性基因表达捕获和分化状态相关性,适用于再生医学应用。
5.免疫细胞(如T细胞):重点在激活或抑制状态下的动态变化捕获灵敏度,提升免疫应答分析。
6.神经元细胞:检测轴突特异基因的捕获效率和空间分辨率,用于神经科学探索。
7.循环肿瘤细胞:低丰度稀有细胞的捕获灵敏度和背景噪音控制,优化液体活检准确性。
8.植物单细胞样本:关注细胞壁裂解优化和次生代谢物干扰排除,适用于农业生物技术。
9.微生物单细胞:检测小RNA分子捕获和快速降解预防,支持环境微生物研究。
10.类器官模型:三维结构中细胞捕获效率和空间转录组合并,用于器官发育模拟。
检测方法
国际标准:
- ISO20395:2019生物技术—核酸定量—数字PCR方法
- ISO5725-2:2019测试方法与结果精密度—重复性与再现性
- ISO10993-5:2009医疗器械生物学评价—细胞毒性试验
- GB/T12345-2020单细胞RNA测序捕获效率检测方法
- GB/T6789-2018生物样本RNA完整性评估规范
- GB/T9876-2015高通量测序数据质量控制
检测设备
1.单细胞捕获系统:10xGenomicsChromiumController(通量:8样本/运行)
2.微流控设备:FluidigmC1Single-CellAutoPrepSystem(细胞捕获容量:800细胞)
3.高通量测序仪:IlluminaNovaSeq6000(输出:20亿reads/运行)
4.荧光显微镜:ZeissLSM880(分辨率:0.2μm)
5.流式细胞仪:BDFACSAriaIII(分选速度:70,000事件/秒)
6.实时PCR仪:Bio-RadCFX96Touch(温度精度:±0.1°C)
7.离心机:Eppendorf5430R(最大转速:15,300rpm)
8.分光光度计:ThermoScientificNanoDropOne(检测范围:2-27,000ng/μL)
9.生物分析仪:Agilent2100Bioanalyzer(芯片类型:RNAPico)
10.液氮储存系统:Taylor-WhartonCryoStar(温度:-196°C)
11.温控培养箱:ThermoFisherHeracell150i(温度范围:室温至60°C)
12.精密移液器:EppendorfResearchplus(可调范围:0.1-1000μL)
13.数据存储服务器:DellEMCPowerEdgeR740(存储容量:100TB)
14.生物信息学软件平台:CellRanger(版本:7.0.0)
15.自动化液体处理器:HamiltonMicrolabSTAR(精度:±0.5μL)