检测项目
基因分型检测:
- SSR标记分析:等位基因数(Na≥5)、多态性信息含量(PIC≥0.25)(参照ISFG2016)
- SNP分型:次要等位基因频率(MAF≥0.05)、哈迪温伯格平衡偏差(P>0.01)
- InDel检测:插入缺失长度(2-50bp)、群体分布频率(≥15%)
- qRT-PCR定量:相对表达量(2-ΔΔCt±0.3)、差异表达倍数(|log2FC|≥1)
- 转录组测序:差异基因数(FDR≤0.05)、GO富集P值(≤1E-5)
- DNA甲基化:CpG岛甲基化率(5-40%)、差异甲基化区域(DMRs≥100)
- 组蛋白修饰:H3K4me3修饰强度(RPKM≥5)
- 酵母双杂交:阳性克隆数(≥10^4CFU)、β-半乳糖苷酶活性(Units≥20)
- Pull-down检测:结合亲和力(KD≤10μM)
- 渗透调节:脯氨酸含量(≥30μmol/gFW)、可溶性糖积累量(≥15mg/g)
- 抗氧化酶活:SOD活性(≥200U/mgprot)、CAT清除率(≥60%)
- 遗传分化系数:Fst值(0.05-0.25)、基因流(Nm≥1)
- 系统发育树:自举值(≥70)、遗传距离(0.1-0.8)
- 单倍型频率(≥5%)、连锁不平衡(r²≥0.8)
- 蛋白结构域:RMSD值(≤2Å)、自由能(ΔG≤-10kcal/mol)
- ABA含量:50-200ng/gFW(HPLC-ESI-MS/MS)
- 亚细胞定位:荧光强度比(核/质≥3.0)
检测范围
1.小麦种质资源:重点检测TaDREB1基因单倍型与气孔导度的相关性
2.玉米自交系:分析ZmAREB转录因子启动子区SNP对ABA响应的调控
3.水稻核心种质:检测OsLEA3蛋白等电点变异与渗透胁迫耐受性
4.棉花野生近缘种:扫描GhNAC67内含子区SSR多态性
5.大豆育成品种:验证GmDREB2基因拷贝数变异与根系活力
6.高粱地方种:分析SbP5CS等位基因组合与脯氨酸合成效率
7.谷子突变体库:检测SiASR1甲基化水平与叶绿素稳定性
8.马铃薯品系:评估StCDPK基因表达与块茎水分保持力
9.油菜种质:关联BnPOD同工酶谱与膜脂过氧化程度
10.苜蓿种源:鉴定MsMAPK磷酸化位点保守性
检测方法
国际标准:
- ISO21572:2019植物DNA提取与纯化
- MIQE指南(ClinChem2009)实时荧光定量PCR技术规范
- IlluminaNovaSeq6000平台PE150测序流程
- GB/T38571-2020植物品种鉴定SSR分子标记法
- GB/T34820-2017转基因植物实时荧光PCR检测
- NY/T1433-2021水稻品种真实性SNP标记检测
检测设备
1.毛细管电泳仪:ABI3730xl型(片段分辨率±1bp,荧光通道数6)
2.实时荧光定量PCR仪:QuantStudio7Pro(温度均一性±0.1℃,检测通道5)
3.高通量测序仪:NovaSeq6000(通量2TB/run,Q30≥85%)
4.超高效液相色谱仪:WatersACQUITYUPLC(压力上限15000psi,柱温控制±0.5℃)
5.激光共聚焦显微镜:LSM900(轴向分辨率0.2μm,光谱检测范围410-750nm)
6.蛋白互作分析仪:OctetRED96e(分子结合解离常数检测限10pM-1mM)
7.全自动核酸提取仪:KingFisherFlex(通量96样本/批次,DNA得率≥10ng/μl)
8.超微量分光光度计:NanoDropOne(检测范围2-3700ng/μl,A260/A280精度±0.1)
9.梯度PCR仪:T100ThermalCycler(升降温速率5℃/s,孔间温差±0.2℃)
10.冷冻离心机:CR22N(最大RCF24,500×g,温控范围-20℃至40℃)