检测项目

病毒载量测定：

• 基因组定量：检测下限≤50copies/mL、线性范围10^1-10^7copies/mL（参照ISO15189）
• 重复性验证：批内CV≤3%、批间CV≤5%（WS/T420-2013）

• 靶标基因鉴定：ORF30基因保守区Tm值（83.5±0.5℃）、JianCe39基因扩增效率（90%-110%）
• 交叉反应排除：HSV-1/E6引物ΔCt≥8、EJianCe/CMV非特异性扩增阴性

• 内参基因检测：β-actinCt值≤28（扩增阈值0.05）
• 阳性对照：定量标准品梯度偏差≤0.5log

• 病毒载量与临床症状分级：皮损样本≥10^4copies/mL判为活动性感染
• 治疗监测：抗病毒治疗后载量下降≥1log为有效

• 核酸纯度：A260/A280比值1.8-2.0
• 抑制剂检测：内标基因延迟≤2个Ct值

检测范围

1.临床样本：生殖器分泌物/脑脊液/血清，重点检测病毒载量定量及基因型确认

2.生物制品：细胞培养物与疫苗原液，检测病毒残留DNA≤10copies/剂

3.医疗器械：妇科介入器具冲洗液，检测病毒污染限值≤100copies/cm²

4.法医样本：干涸体液斑痕，采用硅膜柱法回收微量DNA（≥5copies/μL）

5.实验动物组织：HSV-2感染模型脑组织，检测病毒扩散动力学

6.环境样本：医院污水系统，监测病毒灭活效率（载量下降≥3log）

7.药品辅料：病毒灭活验证试验，检测DNA残留≤1IU/mL

8.科研试剂：质控品定值（10^3-10^6copies/μL），偏差≤±0.3log

检测方法

国际标准：

• WHO/BS.2017.2302病毒核酸定量技术指南
• CLSIEP17-A2检测限评估规程

• GB/T37870-2019核酸定量检测质量控制
• WS/T420-2013临床PCR实验室质量指标

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：AppliedBiosystems7500型（6通道检测，温控精度±0.1℃）

2.核酸提取仪：MagCoreHF16全自动系统（磁珠法，提取效率≥95%）

3.超微量分光光度计：NanoDropOne（检测范围2-15000ng/μL，分辨率1ng/μL）

4.生物安全柜：EscoAirstream4（HEPA过滤效率99.999%）

5.低温离心机：Eppendorf5430R（最大转速30,000rpm，温控范围-20℃~40℃）

6.恒温金属浴：LabnetAccuBlock（控温精度±0.3℃，温度范围25℃-100℃）

7.微量移液器：GilsonPipetmanL（量程0.1-1000μL，误差≤0.8%）

8.电泳系统：Bio-RadPowerPacBasic（电压范围10-300V，电流400mA）

9.超纯水系统：MerckMilli-QIQ7003（产水电阻率18.2MΩ·cm）

10.数据分析软件：SDS2.4（支持ΔΔCt算法，ROX荧光校正）