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心脏灌流ATP生成量试验

  • 原创官网
  • 2025-07-28 10:15:38
  • 关键字:北检研究院,心脏灌流ATP生成量试验

相关:

概述:本试验聚焦离体心脏标本在灌流体系中的三磷酸腺苷(ATP)合成能力检测,核心为量化心肌细胞线粒体氧化磷酸化效率。通过精确控制灌流液成分(氧分压≥80kPa,葡萄糖6mmol/L)、温度(37±0.5℃)及灌注压力(80±5cmH2O),实时监测心肌耗氧量(MO2)与ATP合成速率(μmol/min/g dw)。关键技术指标包括基础/最大呼吸态ATP产率、磷氧比(P/O值)及线粒体膜电位(ΔΨm)动态变化。

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注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

因篇幅原因,CMA/CNAS证书以及未列出的项目/样品,请咨询在线工程师。

☌ 询价

检测项目

基础代谢参数:

  • ATP生成速率:基础态(≥1.2μmol/min/gdw)、最大呼吸态(≥4.8μmol/min/gdw)
  • 磷氧比(P/O):NADH通路(≥2.5)、FADH2通路(≥1.5)
线粒体功能指标:
  • 呼吸控制率(RCR):复合物Ⅰ底物(≥4.0),参照ISO14042:2000
  • 膜电位稳定性:ΔΨm衰减率(≤15%/10min)
能量底物代谢:
  • 葡萄糖利用率:吸收速率(0.8-1.2μmol/min/gww)
  • 游离脂肪酸氧化:棕榈酸酯β氧化量(≥120nmol/min/gdw)
离子转运效能:
  • 钙离子循环耗能:SERCA泵ATP消耗占比(≤35%)
  • 钠钾泵电流密度:INa/K密度(1.5-2.0pA/pF)
氧化应激参数:
  • 活性氧生成:H2O2通量(≤50pmol/min/mgprot)
  • 抗氧化酶活性:SOD(≥25U/mgprot)、GPx(≥0.4μmol/min/mgprot)
凋亡标志物:
  • 细胞色素C释放量:胞浆浓度(≤0.8ng/mgprot)
  • caspase-3活化率:活性单位(≤15RFU/μgprot/h)
代谢物通量分析:
  • 乳酸/丙酮酸比值(≤20)
  • 乙酰辅酶A浓度(≥15nmol/mgprot)
电生理耦合:
  • 兴奋收缩耦联效率:单位动作电位ATP消耗量(≤8.5fmol/AP)
  • 机械-代谢效率:张力-ATP消耗比(≥12mN/μmolATP)
病理模型参数:
  • 缺血再灌注损伤指数:ATP恢复率(≥65%)
  • 药物毒性阈值:IC50值(μmol/L)
质量控制参数:
  • 标本活性维持:LDH泄漏率(≤5%/h)
  • 渗透压稳定性:灌流液偏差(±10mOsm/kg)

检测范围

1.哺乳动物离体心脏:大鼠/豚鼠/兔心脏Langendorff灌流模型,重点检测跨膜质子梯度与复合物Ⅳ功能

2.心肌切片标本:300μm厚心肌切片,侧重线粒体集群呼吸链功能同步性

3.原代心肌细胞:新生动物心室肌细胞,检测单细胞ATP荧光探针信号衰减率

4.干细胞衍生心肌细胞:hiPSC-CMs,评估成熟度相关的线粒体嵴密度(≥8嵴/μm²)

5.缺血再灌注模型:30min缺血/60min再灌标本,测量复合物Ⅰ活性恢复值(≥75%)

6.药物干预模型:

7.代谢疾病模型:糖尿病心肌标本,检测乙酰化修饰对ATP合酶活性抑制(≤45kU/mg)

8.基因编辑心肌:AMPK敲除模型,测定基础代谢率偏移量(+20~30%)

9.人工心脏材料:生物反应器培养工程化心肌,验证收缩-产能耦联效率(≥0.85)

10.冷冻复苏标本:液氮冻存心肌组织,评估复温后OXPHOS复合物完整性(解聚率≤15%)

检测方法

国际标准:

  • ISO14042:2000线粒体呼吸链复合物活性测定
  • OECD432:2019离体心脏毒性测试规范
  • AHAScientificStatement2016心肌能量代谢测量指南
国家标准:
  • GB/T16886.15-2022医疗器械生物学评价-离体器官试验
  • YY/T1556-2017心肌细胞耗氧量检测方法
  • GB/Z39502-2020高通量ATP检测技术规范
(方法差异说明:ISO14042采用分光光度法测复合物活性,而GB/T16886.15要求同步记录机械功能;AHA指南规定灌流液HCO3-缓冲体系,YY/T1556允许HEPES缓冲替代)

检测设备

1.离体心脏灌流系统:HSE-SYSTHEM模块化系统(恒温精度±0.1℃,压力波动≤1%)

2.高分辨率氧电极:OROBOROSO2k(氧分辨率0.1nmol/mL,响应时间<2s)

3.荧光能量代谢分析仪:PerkinElmerEnVision(ATP检测限50amol/孔)

4.液相色谱-质谱联用仪:ThermoQExactiveHF(代谢物定量限0.1pmol)

5.膜电位荧光检测系统:ZeissLSM980+TMRM模块(时间分辨率5ms)

6.微量热仪:TAInstrumentsNanoDSC(热功率分辨率0.1μW)

7.离子流检测系统:IonOptixMyoCam-S2(空间分辨率0.2μm)

8.激光共聚焦显微镜:LeicaStellaris8(FRET效率检测精度±2%)

9.生物能量分析仪:SeahorseXFe96(同时检测OCR/ECAR)

10.低温超速离心机:BeckmanOptimaXPN-100(最大RCF1,000,000g)

11.电生理记录系统:MolecularDevicesAxon700B(膜片钳噪声<0.1pA)

12.振动切片机:LeicaVT1200S(切片厚度误差±5μm)

13.化学发光检测仪:BertholdTriStarLB942(动态范围8数量级)

14.pH稳定系统:SIAnalyticsLab855(pH波动±0.01)

15.微量灌流泵:HarvardApparatusPHDUltra(流量精度0.1μL/min)

北检(北京)检测技术研究院【简称:北检院】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

以上是与"心脏灌流ATP生成量试验"相关的简单介绍,具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。

    材料检测服务

    专业分析各类金属、非金属材料的成分、结构与性能,提供全面检测报告和解决方案。包括金属材料力学性能测试、高分子材料老化试验、复合材料界面分析等。

    化工产品分析

    精准检测各类化工产品的成分、纯度及物理化学性质,确保产品质量符合国家标准。服务涵盖有机溶剂分析、催化剂表征、高分子材料分子量测定等。

    环境检测服务

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    凭借专业团队和先进设备,致力于为企业研发、质量控制及市场准入提供精准可靠的技术支撑,助力品质提升与合规发展。