ISO29195耐旱基因表达量检测

检测项目

RNA质量控制检测：

• 纯度测定：OD260/OD280比值（1.8-2.0参照ISO29195）
• 完整性评估：RIN值（≥7.0参照ISO29195）
• 浓度校准：偏差值（±5%）

cDNA合成效率检测：

• 反转录效率：cDNA得率（≥95%）
• 模板稳定性：降解率（≤3%/h）

引物特异性验证：

• 扩增曲线斜率：效率（90%-110%）
• 熔解曲线分析：单峰特性（Tm值偏差±1°C）

PCR扩增参数检测：

• 循环阈值：Ct值变异系数（CV≤5%）
• 扩增线性：R²值（≥0.98）

标准曲线构建检测：

• 斜率范围：-3.1至-3.6
• 相关系数：R²≥0.99

基因表达定量检测：

• 相对表达量：ΔΔCt值（±0.5标准差）
• 绝对定量：拷贝数/μgRNA（检测限1拷贝）

数据归一化处理：

• 内参基因稳定性：M值（≤0.5）
• 表达比例校准：foldchange误差（≤10%）

统计显著性分析：

• 差异表达p值（≤0.05）
• 置信区间：95%CI宽度（±0.3）

重复性评估检测：

• 批内变异：RSD（≤5%）
• 批间再现性：CV（≤8%）

综合质量控制：

• 阴性对照检测：无扩增信号（Ct≥40）
• 阳性对照偏差：ΔCt值（±0.5）

检测范围

1.水稻叶片组织：聚焦干旱胁迫下DREB2A基因表达峰值检测，强调RNA降解控制

2.小麦根尖样本：针对LEA3基因在水分缺失中的表达动态，重点监测cDNA合成完整性

3.玉米种子胚乳：检测ABA响应基因表达变化，强化扩增特异性验证

4.大豆幼苗茎秆：评估耐旱转录因子表达水平，侧重数据归一化稳定性

5.棉花纤维组织：分析胁迫相关基因表达量变异，突出重复性控制

6.马铃薯块茎样本：检测脱水响应基因表达，注重RNA提取纯度

7.番茄果实表皮：监测ROS清除基因表达动态，强调PCR效率校准

8.油菜花叶片：评估干旱耐受基因表达趋势，聚焦统计显著性分析

9.甘蔗茎节组织：检测渗透调节基因表达量，重点质量控制参数

10.高粱根系样本：分析水分胁迫下基因表达模式，强化标准曲线构建

检测方法

国际标准：

• ISO29195:2023植物耐旱基因表达实时荧光定量PCR检测
• ISO20395:2019生物分子定量分析指南

国家标准：

• GB/T37871-2019植物基因表达量检测技术规范
• GB/T34796-2017核酸提取与纯化方法

方法差异说明：GB/T标准要求更高RNA完整性阈值（RIN≥8.0vsISORIN≥7.0），PCR扩增温度范围GB/T限定94-96°C（ISO允许94-98°C），数据归一化GB/T强制双内参基因（ISO允许单内参）。

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：CFX96Touch型（热循环范围4-99°C，检测通道6色）

2.核酸提取工作站：KingFisherFlex型（通量96样本/批，磁珠回收率≥98%）

3.微量分光光度计：NanoDropOneC型（波长范围190-850nm，精度±0.1）

4.电泳成像系统：GelDocGo型（分辨率5百万像素，UV透射范围302nm）

5.高速离心机：Microfuge20R型（转速20000rpm，温控4-40°C）

6.恒温水浴锅：T100型（温度范围5-99°C，精度±0.1°C）

7.超低温冰箱：JianCeT1386型（温度-86°C，容量600L）

8.生物安全柜：BSC-1300IIA2型（风速0.5m/s，HEPA过滤效率99.99%）

9.振荡混匀仪：Vortex-Genie2型（转速100-3200rpm，定时0-60min）

10.微量加样器：ResearchPlus型（体积范围0.1-1000μL，精度±0.5%）

11.恒温培养箱：BinderBD56型（温度范围5-70°C，湿度控制20-95%）

12.冷冻干燥机：Alpha1-4LDplus型（冷凝温度-80°C，真空度0.01mbar）

13.PCR板离心机：MiniSpin型（转速6000rpm，时间设定1-10min）

14.核酸定量仪：Qubit4.0型（检测限0.1pg/μL，荧光染料兼容性）

15.数据分析工作站：Precision7865型（处理器16核，内存128GB）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"ISO29195耐旱基因表达量检测"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。