心脏灌流氧化应激分析

检测项目

氧化应激标志物检测：

• 活性氧物种测定：超氧阴离子浓度（单位nmol/min/mg蛋白质，参照ISO21427-1）、羟自由基水平（检测限≤0.05nM）
• 过氧化氢分析：H2O2含量（范围0.1-100μM，精度±2%）
• 一氧化氮检测：NO代谢产物（nitrite/nitrate比值，标准偏差±0.01）

抗氧化酶活性测定：

• 超氧化物歧化酶：SOD活性（单位U/mg蛋白质，参照GB/T5009.171-2016）
• 谷胱甘肽过氧化物酶：GSH-Px活性（活力≥50U/mg）
• 过氧化氢酶：CAT活性（比活力定义0.1-10μmol/min/mg）

脂质过氧化产物分析：

• 丙二醛检测：MDA浓度（nmol/mg蛋白质，检测限0.1nmol）
• 4-羟基壬烯醛测定：HNE水平（范围0.01-10μM）
• 硫代巴比妥酸反应物：TBARS值（单位μM，参照ASTME2520）

蛋白质氧化损伤评估：

• 羰基化蛋白测定：蛋白质羰基含量（nmol/mg蛋白质）
• 硫醇基团分析：总硫醇水平（检测精度±0.5%）
• 硝基酪氨酸检测：酪氨酸硝化程度（参考值≤5%）

DNA损伤检测：

• 8-羟基脱氧鸟苷测定：8-OHdG浓度（pg/mL，检测限0.1pg）
• 彗星试验：DNA断裂指数（范围0-100，参照ISO21427-2）
• 氧化碱基分析：鸟嘌呤氧化产物（偏差±0.01%）

炎症因子关联分析：

• 白细胞介素-6检测：IL-6水平（pg/mL，标准范围5-100）
• 肿瘤坏死因子-α测定：TNF-α浓度（检测限1pg/mL）
• C反应蛋白分析：CRP值（单位mg/L，精度±0.1）

代谢产物变化监测：

• 乳酸脱氢酶测定：LDH泄漏量（单位U/L，参照GB/T5009.92-2017）
• 三磷酸腺苷分析：ATP浓度（nmol/mg蛋白质）
• 谷胱甘肽水平：GSH/GSSG比值（检测范围0.1-10）

细胞活力测定：

• MTT试验：细胞存活率（%，参照ISO10993-5）
• 乳酸脱氢酶释放：LDH释放率（单位%）
• 台盼蓝染色：死细胞比例（精度±0.5%）

基因表达分析：

• Nrf2通路检测：Nrf2mRNA表达量（相对倍数变化）
• HO-1基因表达：血红素加氧酶-1水平（检测偏差±0.01）
• SOD同工酶分析：SOD1/SOD2比率（单位比值）

形态学变化观察：

• 心肌细胞凋亡检测：TUNEL阳性细胞比例（%，参照ISO21427-2）
• 线粒体结构评估：线粒体膜电位变化（单位%）
• 组织病理学评分：坏死面积比例（范围0-100%）

检测范围

1.新鲜心肌组织样本：涵盖缺血再灌注模型中的左心室组织，重点检测原位氧化损伤标志物如ROS和MDA浓度

2.冷冻心肌切片样本：用于长期保存的横截面样本，侧重组织固定后SOD活性和DNA损伤分析

3.血清样本：从动物或临床来源采集，核心检测炎症因子如IL-6和抗氧化酶水平

4.血浆样本：抗凝处理的血样，重点评估氧化应激代谢产物如GSH/GSSG比值

5.全血样本：包含血细胞成分，检测重点为总抗氧化能力和脂质过氧化指标

6.细胞培养上清液：心肌细胞培养液，侧重细胞活力相关参数如LDH释放率和MTT结果

7.心脏灌流液：离体灌流系统流出液，核心检测ROS生成动态和代谢物变化

8.线粒体提取物：从心肌分离的线粒体，重点分析膜电位波动和ATP浓度

9.细胞悬浮液：单细胞悬液样本，检测基因表达水平和凋亡指数

10.组织匀浆样本：机械破碎的心肌组织，侧重蛋白质氧化损伤和酶活性测定

检测方法

国际标准：

• ISO21427-1:2020细胞遗传学试验用于检测DNA损伤
• ISO10993-5:2021体外细胞毒性试验方法
• ASTME2520-18硫代巴比妥酸反应物质测定脂质过氧化
• ISO21427-2:2018彗星试验评估DNA断裂
• ENISO20685:2022生物样本抗氧化能力测定

国家标准：

• GB/T5009.171-2016食品中超氧化物歧化酶活性测定
• GB/T5009.92-2017食品中乳酸脱氢酶测定
• GB/T39229-2020生物样品中丙二醛含量测定
• GB/T40182-2021细胞凋亡检测方法
• GB/T20340-2022血清炎症因子酶联免疫吸附试验

（方法差异说明：国际标准ISO21427-1要求特定染色剂浓度，国家标准GB/T5009.171采用不同缓冲体系；ASTME2520规定TBARS提取温度高于GB/T39229；ISO10993-5细胞培养时间较GB/T40182延长24小时）

检测设备

1.荧光分光光度计：RF-6000型（波长范围200-900nm，分辨率0.1nm）

2.高效液相色谱仪：LC-2030C型（流速范围0.001-10mL/min，检测下限0.01ng/mL）

3.实时荧光定量PCR仪：CFX96型（温度梯度±0.1℃，通道数6）

4.酶标仪：MultiskanSkyHigh型（波长范围340-850nm，精度±1%）

5.流式细胞仪：CytoFLEXS型（激光波长488/640nm，检测速度10000细胞/秒）

6.冷冻离心机：CR22N型（转速范围100-20000rpm，温度控制-20℃至40℃）

7.生物显微成像系统：BX53型（放大倍数40-1000×，分辨率0.2μm）

8.电化学工作站：CHI760E型（电流范围±250mA，电位范围±10V）

9.紫外可见分光光度计：UV-2600型（波长范围190-1100nm，带宽1nm）

10.组织匀浆机：T10型（转速8000-30000rpm，容量10mL）

11.低温恒温槽：DC-2006型（温度范围-20℃至100℃，稳定性±0.1℃）

12.细胞培养箱：MCO-170型（温度范围RT至50℃，CO2控制0-20%）

13.蛋白印迹系统：Mini-PROTEAN型（电压范围10-300V，转移时间5-60分钟）

14.气相色谱质谱联用仪：GCMS-QP2020型（质量范围10-1000m/z，扫描速度12500u/sec）

15.冰冻切片机：CM1950型（切片厚度1-100μm，温度控制-35℃至-5℃）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"心脏灌流氧化应激分析"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。