神经丝轻链蛋白表达量检测方法测定

检测项目

浓度定量：

• 绝对浓度检测：检测限（LOD≤0.1pg/mL），定量限（LOQ≤0.5pg/mL，参照CLSIEP17-A2）
• 相对表达量分析：比值计算（NfL/总蛋白，偏差±5%）

• 检测下限确认：最低可测浓度（≤0.2pg/mL）
• 信号响应评估：剂量-响应曲线斜率（R²≥0.99）

• 交叉反应检测：与非靶蛋白反应率（≤3%，参照ISO15189）
• 干扰物质评估：溶血样本影响（偏差<10%）

• 批内精密度：变异系数（CV≤8%）
• 批间精密度：变异系数（CV≤12%）

• 回收率测试：加标回收率（90%-110%）
• 标准品偏差：参考物质浓度偏差（±5%）

• 动态范围验证：线性区间（1-1000pg/mL，R²≥0.98）
• 稀释线性：样本稀释偏差（±7%）

• 冻融稳定性：多次冻融浓度变化（偏差<15%）
• 长期储存稳定性：-80℃保存偏差（<10%/年）

• 健康人群基线：浓度范围（<10pg/mL血清）
• 疾病阈值设定：诊断临界值（≥20pg/mL）

• 平台间一致性：ELISA与Simoa相关性（r≥0.95）
• 试剂批次差异：批间CV（≤5%）

• 内部质控：质控品浓度偏差（±2SD）
• 外部质评：参与率（100%）

检测范围

1.人血清样本：新鲜采集或冻存血清，重点检测抗凝剂干扰和浓度基线

2.脑脊液样本：腰椎穿刺获取标本，侧重低浓度检测（<10pg/mL）及稳定性分析

3.血浆样本：EDTA或肝素抗凝血浆，检测抗凝剂对NfL回收率影响

4.尿液样本：晨尿或随机尿标本，重点筛查稀释效应和基质干扰

5.组织匀浆样本：脑组织或神经组织匀浆，侧重均质化处理及蛋白提取效率

6.细胞培养上清：神经元细胞培养液，检测分泌型NfL动态变化

7.冻存生物样本：-80℃长期存储标本，评估冻融循环稳定性

8.EDTA抗凝样本：特定抗凝处理血清/血浆，验证金属离子干扰

9.肝素抗凝样本：肝素处理体液，检测多糖类物质交叉反应

10.穿刺液样本：临床穿刺获取标本，重点分析样本新鲜度对结果影响

检测方法

国际标准：

• ISO15189:2022医学实验室质量和能力要求
• CLSIEP17-A2检测限和定量限评估指南
• CLSIEP05-A3精密度性能评价
• ISO5725测试方法准确度评定

• GB/T29791.1-2013体外诊断医疗器械性能评价
• GB/T21415-2008体外诊断试剂稳定性评价
• GB/T37864-2019生物样本中蛋白标志物检测方法
• GB/T33411-2016酶联免疫吸附试验方法

检测设备

1.酶标仪：BioTekSynergyH1（波长范围280-750nm，精度±1%）

2.离心机：Eppendorf5430R（最大转速15000rpm，容量24×1.5mL）

3.微量加样器：EppendorfResearchPlus（体积范围0.1-1000μL，误差±0.5%）

4.恒温孵育箱：MemmertIN55（温度范围4-60℃，稳定性±0.1℃）

5.振荡器：IKAMS3digital（转速50-1500rpm，振幅3mm）

6.超低温冰箱：ThermoScientificTSX（温度-86℃，容量700L）

7.分光光度计：ThermoNanoDropOne（检测限0.2-27,000ng/μL）

8.生物安全柜：EscoAura（洁净度Class100，风速0.3m/s）

9.pH计：MettlerToledoSevenExcellence（精度±0.001pH）

10.天平：SartoriusCubisII（量程0.001g-220g，精度±0.0001g）

11.水浴锅：JulaboSW22（温度范围5-99℃，均匀性±0.1℃）

12.磁珠分离器：KingFisherFlex（处理通量96样本/批次）

13.洗板机：BioTekELx405（清洗精度CV≤2%）

14.单分子检测仪：QuanterixSR-X（灵敏度0.01pg/mL）

15.数据分析软件：GraphPadPrism（版本9.0，支持四参数拟合）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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