慢性心力衰竭大鼠模型的长期灌注毒性观察分析

检测项目

心功能检测：

• 左心室射血分数（LVEF%）、左心室短轴缩短率（LVFS%）、左心室舒张末期内径（LVEDD/mm）
• 左心室收缩末期内径（LVESD/mm）、每搏输出量（SV/mL）、心输出量（CO/L/min）

心肌病理形态学检测：

• 心肌细胞横截面积（μm²，ImageJ软件分析）、心肌纤维化程度（Masson染色阳性面积%）
• 心肌细胞凋亡率（TUNEL阳性细胞%，参照GB/T16886.5-2017）、心肌胶原容积分数（CVF%）

血液生化指标检测：

• 脑钠肽（BNP/ng/mL，化学发光免疫分析法）、肌钙蛋白I（cTnI/pg/mL，电化学发光法）
• 乳酸脱氢酶（LDH/U/L）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST/U/L）、丙氨酸氨基转移酶（ALT/U/L）

氧化应激指标检测：

• 超氧化物歧化酶（SOD/U/mL，黄嘌呤氧化酶法）、丙二醛（MDA/nmol/mL，硫代巴比妥酸法）
• 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/U/mL，二硫代二硝基苯甲酸法）、活性氧（ROS/DCF荧光强度）

神经内分泌系统指标检测：

• 血管紧张素Ⅱ（AngⅡ/pg/mL，ELISA法）、醛固酮（ALD/ng/dL，放射免疫法）
• 去甲肾上腺素（NE/ng/mL，高效液相色谱法）、肾素活性（PRA/ng·mL⁻¹·h⁻¹）

炎症反应指标检测：

• 肿瘤坏死因子-α（TNF-α/pg/mL，流式细胞术）、白细胞介素-6（IL-6/pg/mL，化学发光法）
• C反应蛋白（CRP/mg/L，免疫比浊法）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1/pg/mL）

肾功能指标检测：

• 血肌酐（Scr/μmol/L，肌氨酸氧化酶法）、血尿素氮（BUN/mmol/L，尿素酶法）
• 尿蛋白肌酐比值（UACR/mg/g，免疫透射比浊法）、尿β2-微球蛋白（β2-MG/μg/L）

心肌能量代谢检测：

• 心肌ATP含量（nmol/mg蛋白，荧光素酶法）、心肌线粒体呼吸控制率（RCR，氧电极法）
• 游离脂肪酸（FFA/mmol/L，酶法）、心肌糖原含量（mg/g湿重，蒽酮比色法）

血液流变学检测：

• 全血高切粘度（200s⁻¹/mPa·s）、全血低切粘度（10s⁻¹/mPa·s）、血浆粘度（1s⁻¹/mPa·s）
• 红细胞压积（HCT%）、红细胞聚集指数（AI）、红细胞变形指数（DI）

体重及脏器系数检测：

• 大鼠体重变化（g/周）、心脏重量指数（HW/BW，mg/g）、左心室重量指数（LVW/BW，mg/g）
• 肝脏重量指数（LW/BW，mg/g）、肾脏重量指数（KW/BW，mg/g）

药物代谢动力学检测：

• 血药浓度（μg/mL，LC-MS/MS法）、药时曲线下面积（AUC₀→∞/μg·h·mL⁻¹）
• 消除半衰期（t₁/₂/h）、达峰时间（Tmax/h）、达峰浓度（Cmax/μg/mL）

检测范围

1.实验动物模型：腹主动脉缩窄（AAC）诱导的慢性心力衰竭大鼠、冠状动脉结扎（LAD）诱导的心肌梗死大鼠、异丙肾上腺素（ISO）诱导的心肌纤维化大鼠

2.灌注药物类型：小分子化学药物（如血管紧张素转换酶抑制剂）、生物制剂（如重组人脑钠肽）、中药提取物（如黄芪多糖、丹参酮ⅡA）

3.灌注途径：静脉持续灌注（尾静脉埋置Alzet微型渗透泵）、腹腔间歇灌注（每周2次腹腔注射）、口服灌胃（每日1次gavages）

4.灌注周期：短期灌注（4周，初步毒性筛选）、中期灌注（8周，亚慢性毒性评价）、长期灌注（12-24周，慢性毒性观察）

5.动物年龄分层：青年大鼠（2-3月龄，体重200-250g）、中年大鼠（6-8月龄，体重300-350g）、老年大鼠（12-14月龄，体重400-450g）

6.动物性别分组：雄性大鼠（避免雌激素对心功能的干扰）、雌性大鼠（研究性别差异对毒性的影响）、去卵巢雌性大鼠（模拟绝经后女性生理状态）

7.药物剂量梯度：低剂量组（1mg/kg/d，临床等效剂量的1倍）、中剂量组（3mg/kg/d，临床等效剂量的3倍）、高剂量组（10mg/kg/d，临床等效剂量的10倍）

8.联合用药方案：ACEI+β受体阻滞剂（如卡托普利+美托洛尔）、中药提取物+西药（如黄芪多糖+缬沙坦）、抗氧化剂+抗炎药物（如维生素C+布洛芬）

9.对照分组：假手术组（仅分离腹主动脉未缩窄）、模型对照组（生理盐水灌注）、阳性药物对照组（卡托普利10mg/kg/d，临床常用抗心衰药物）

10.特殊人群模拟模型：糖尿病合并慢性心力衰竭大鼠（链脲佐菌素诱导糖尿病+AAC）、高血压合并慢性心力衰竭大鼠（L-NAME诱导高血压+LAD）

检测方法

国际标准：

• ASTME1386-02(2017)动物组织病理学检查标准指南（用于心肌病理切片的制备与观察）
• OECDTestGuideline407重复剂量28天经口毒性研究（用于灌注周期设计及一般毒性指标检测）
• ISO15197:2013体外诊断医疗器械血糖监测系统通用要求（用于血液生化指标的样本处理与质量控制）
• ASTMF2149-16细胞凋亡检测标准方法（用于TUNEL法检测心肌细胞凋亡率）

国家标准：

• GB/T14926.1-2001实验动物小鼠大鼠生化指标检测（用于血液生化指标的参考值设定）
• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验（用于细胞凋亡率检测的细胞培养方法）
• GB/T35532-2017实验动物长期毒性试验技术要求（用于12周长期灌注试验的方案设计）
• WS/T404.5-2018临床常用生化检验项目参考区间第5部分：血清酶类（用于乳酸脱氢酶、转氨酶等指标的结果判断）

（方法差异说明：国际标准ASTME1386-02(2017)要求病理切片的连续切片数量≥5张，而国家标准GB/T14926.1-2001规定生化指标检测的样本量≥3重复；OECDTestGuideline407规定的28天短期灌注周期适用于初步毒性筛选，本研究采用的12周长期灌注周期需参考GB/T35532-2017的长期毒性试验要求，增加了心功能、病理形态等指标的检测频率）

检测设备

1.小动物超声影像系统：VisualSonicsVevo2100（探头频率18-38MHz，空间分辨率50μm，用于心功能指标检测）

2.病理切片扫描仪：LeicaAperioAT2（扫描速度20mm²/s，像素分辨率0.25μm，用于心肌病理形态学分析）

3.全自动生化分析仪：RocheCobas8000（检测速度1600测试/小时，试剂舱温度4-8℃，用于血液生化指标检测）

4.流式细胞仪：BDFACSVerse（荧光通道数8个，检测灵敏度<100MESF，用于炎症反应指标检测）

5.酶标仪：ThermoScientificMultiskanFC（波长范围340-850nm，检测精度±1%，用于氧化应激指标检测）

6.电子天平：MettlerToledoXS205（最大量程220g，精度0.01mg，用于体重及脏器重量检测）

7.低温高速离心机：Eppendorf5810R（最大转速15000rpm，温度范围-10至40℃，用于血液样本分离）

8.超纯水机：MilliporeSynergyUV（电阻率18.2MΩ·cm，总有机碳<5ppb，用于试剂配制）

9.二氧化碳培养箱：ThermoScientificForma3111（CO2浓度控制精度±0.1%，温度精度±0.1℃，用于细胞凋亡检测的样本培养）

10.冷冻切片机：LeicaCM1950（切片厚度1-100μm，温度范围-50至20℃，用于心肌病理切片制备）

11.分光光度计：ShimadzuUV-2600（波长精度±0.1nm，吸光度范围0-4A，用于氧化应激指标检测）

12.微型渗透泵：AlzetModel2002（灌注速率0.5μL/h，持续时间14天，用于静脉持续灌注）

13.心电图机：BIOPACMP150（采样率1000Hz，输入阻抗10MΩ，用于大鼠心电图检测）

14.组织匀浆机：SigmaAldrichT18（最大转速25000rpm，处理量0.5-100mL，用于心肌组织匀浆制备）

15.液氮罐：Taylor-WhartonXL-50（容量50L，静态蒸发率<0.5L/天，用于样本长期保存）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"慢性心力衰竭大鼠模型的长期灌注毒性观察分析"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。