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心脏灌流线粒体功能测试

  • 原创官网
  • 2025-07-28 11:55:45
  • 关键字:北检研究院,心脏灌流线粒体功能测试

相关:

概述:心脏灌流线粒体功能测试是一种评估心脏组织中线粒体代谢健康的检测方法,核心检测对象为线粒体呼吸链效率和能量转换能力。关键项目包括呼吸控制率(RCR)、状态3呼吸速率、ATP产生速率、膜电位(ΔΨm)、钙离子浓度调控、以及氧化应激标志物(如ROS生成)。该测试在离体灌流心脏模型中模拟生理或病理条件,用于分析缺血-再灌注损伤、药物毒性及心脏疾病机制,确保数据准确性通过标准化缓冲液和温度控制实现。

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注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

因篇幅原因,CMA/CNAS证书以及未列出的项目/样品,请咨询在线工程师。

☌ 询价

检测项目

呼吸功能检测:

  • 呼吸控制率(RCR):目标值≥4.0(参照ISO10993-5)
  • 状态3呼吸速率:80-120nmolesO2/min/mgprotein
  • 寡霉素抑制比率:≤0.3(表示ATP合成酶抑制效率)
ATP代谢检测:
  • ATP产生速率:≥5μmolATP/min/mgprotein
  • ATP/ADP比值:维持在10:1以上(反映能量状态)
钙处理能力测试:
  • 钙保留容量(CRC):≥100nmolesCa2+/mgprotein
  • 渗透性转换孔开放阈值:[Ca2+]≥250μM(用于评估凋亡敏感性)
氧化应激评估:
  • 活性氧(ROS)生成速率:≤20pmoles/min/mgprotein
  • 谷胱甘肽比率(GSH/GSSG):≥10:1(氧化还原平衡指标)
膜电位测定:
  • 线粒体膜电位(ΔΨm):-150至-180mV(使用荧光染料法)
  • 去极化响应时间:≤5分钟(在应激条件下)
酶活性检测:
  • 复合物I活性:≥50nmolesNADH/min/mg(呼吸链起始点)
  • 柠檬酸合成酶活性:100-150nmoles/min/mg(线粒体密度标志)
基质利用率测试:
  • 丙酮酸氧化速率:≥30nmoles/min/mg
  • 脂肪酸β-氧化效率:耗氧量比率≥0.8(棕榈酰肉碱底物)
耦合效率测试:
  • 磷酸化效率(P/O比率):≥2.5(ATP产出perO原子)
  • 解偶联响应:UCP1激活阈值≤50μMFCCP
复合物活性测定:
  • 复合物IV(细胞色素C氧化酶)活性:≥100nmoles/min/mg
  • 复合物III活性:≥80nmoles/min/mg(泛醌还原率)
渗透性转换测试:
  • 线粒体肿胀指数:吸光度变化≤0.1OD520(钙诱导后)
  • 孔道开放动力学:时间常数τ≤2分钟(荧光探针法)

检测范围

1.离体啮齿动物心脏:大鼠或小鼠新鲜灌流心脏,检测重点为缺血-再灌注损伤模型中的线粒体呼吸功能衰减和钙超载。

2.原代心肌细胞培养:分离自动物或人类的心肌细胞单层,重点检测药物毒性诱导的ATP生产降低和氧化应激。

3.心脏组织切片:冷冻或固定心脏切片,检测重点为局部缺血区域的线粒体膜电位变化和酶活性失衡。

4.转基因动物模型样品:基因编辑动物(如敲除UCP2)的心脏组织,重点检测特定蛋白缺失对呼吸控制率和钙处理的影响。

5.人源诱导多能干细胞衍生心肌细胞:hiPSC-CMs细胞,检测重点为疾病建模(如心衰)中的基质氧化效率和复合物活性。

6.缺血-再灌注损伤模型:模拟心肌梗死后的心脏样本,检测重点为再灌注期间ROS爆发和渗透性转换孔开放。

7.药物处理样本:暴露于心脏毒性药物(如阿霉素)的组织,重点检测ATP合成抑制和膜电位去极化。

8.心衰病理组织:来自心衰模型的心脏,检测重点为慢性能量代谢障碍相关的呼吸链复合物缺陷。

9.年龄相关心脏样本:老年动物或人类心脏,检测重点为线粒体DNA损伤导致的耦合效率下降和氧化应激加剧。

10.运动适应模型:训练后心脏组织,检测重点为增强的脂肪酸氧化能力和钙缓冲能力提升。

检测方法

国际标准:

  • ISO10993-5:2009医疗器械生物学评价-第5部分:细胞毒性测试(适用于线粒体功能评估,缓冲液pH7.4)
  • ISO15193:2009体外诊断医疗器械-测量程序要求(规范呼吸速率测量精度)
  • OECDTG471遗传毒性测试指南(间接用于氧化应激标志物评估)
国家标准:
  • GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价-第5部分:细胞毒性试验(钙处理测试采用特定温育时间)
  • GB/T35876-2018生物样品中ATP含量测定方法(ATP检测使用萤光素酶法)
  • YY/T0127-2018医用电气设备安全通则(设备校准要求差异:GB标准增加湿度控制)
方法差异说明:国际标准(如ISO)优先使用高钾缓冲液,而国家标准(如GB)要求磷酸盐缓冲液;ATP检测中,ISO规定萤光素酶底物浓度0.5mM,GB调整为0.3mM;钙处理测试的采样频率ISO为每秒1次,GB为每5秒1次。

检测设备

1.高分辨率呼吸仪:标准氧电极系统(氧分辨率0.1nM,温度范围0-50°C)

2.荧光分光光度计:通用型号(激发/发射波长范围200-800nm,灵敏度0.01RFU)

3.ATP生物发光检测仪:光度计型(检测限0.1nMATP,线性范围1nM-10μM)

4.钙离子荧光成像系统:共聚焦显微镜(分辨率0.1μm,钙染料如Fluo-4)

5.酶标仪:多通道型(波长精度±1nm,通量96孔板)

6.线粒体分离离心机:高速低温型(转速可达20,000rpm,温度控制±2°C)

7.膜电位检测仪:JC-1荧光系统(比率计量模式,精度±5mV)

8.氧化应激分析仪:DCFH-DA探针系统(ROS检测限1pmole/min)

9.呼吸链复合物活性仪:分光光度计型(吸光范围340-600nm,带宽2nm)

10.基质利用率测试系统:底物注射仪(流速精度±0.1μL/min)

11.渗透性转换检测装置:光密度计(波长520nm,响应时间<0.1秒)

12.恒温灌流系统:循环水浴型(温度稳定性±0.1°C,流速10-100mL/min)

13.SDS-PAGE电泳仪:蛋白分析型(电压范围50-300V,凝胶浓度8-15%)

14.荧光偏振仪:膜流动性检测型(偏振度范围0-300mP)

15.微电极阵列:多通道记录系统(采样率1kHz,阻抗<1MΩ)

北检(北京)检测技术研究院【简称:北检院】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

以上是与"心脏灌流线粒体功能测试"相关的简单介绍,具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。

    材料检测服务

    专业分析各类金属、非金属材料的成分、结构与性能,提供全面检测报告和解决方案。包括金属材料力学性能测试、高分子材料老化试验、复合材料界面分析等。

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