生物制品生产区沉降菌试验

检测项目

采样参数：

• 暴露时间：≥4小时（参照ISO14698-1）
• 采样点分布：关键操作点间距≤3m、高度工作台面（0.8-1.2m）
• 沉降皿放置：水平表面、避免遮挡

培养条件：

• 培养温度：细菌30-35℃、霉菌23-28℃（温度波动±1℃）
• 培养时间：细菌48小时、霉菌72-120小时
• 培养基类型：大豆酪蛋白琼脂（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂（SDA）

菌落计数：

• CFU手动计数：计数误差≤5%、菌落直径≥0.5mm
• CFU自动转换：沉降率换算为CFU/m³（参照ISO14644-1）
• 密度限制：警戒限设定（如ISO5区≤1CFU/皿）

微生物鉴定：

• 细菌分类：革兰氏染色阳性/阴性比例（≥95%准确率）
• 霉菌鉴别：形态学观察（参照ATCC标准）
• 污染源追踪：菌株同源性分析

环境监控参数：

• 温湿度控制：20-25℃、45-65%RH（精度±2%）
• 洁净度等级：ISOClass5-8区域对应采样点密度
• 压差监测：相邻区域压差≥5Pa

采样介质质量控制：

• 培养基灭菌：121℃高压灭菌20分钟
• 阴性对照：灭菌空白皿（0CFU要求）
• 阳性对照：标准菌株接种回收率≥70%

数据分析方法：

• 趋势分析：月度变化率（±10%警戒限）
• 超标处理：警报阈值定义（如>CFU限值触发调查）
• 数据记录：采样日期时间、操作员标识

法规符合性指标：

• GMP符合：EUGMPAnnex1动态监测条款
• 验证标准：工艺验证阶段沉降菌限值
• 报告完整性：全要素覆盖（位置时间结果）

风险控制项目：

• 热点区域识别：高频率采样点（每周一次）
• 人员影响评估：更衣后沉降菌增量
• 设备干扰因子：振动气流影响校正

长期稳定性监测：

• 季度趋势：季节变化分析（湿度相关性）
• 年度回顾：数据归档完整性
• 校正频率：设备校准周期≤6个月

检测范围

1.无菌灌装区：ISO5级高洁净区，重点检测关键操作点如灌装针头附近沉降菌，确保产品无菌保证水平（SAL≤10^-6）

2.细胞培养区：生物反应器及培养箱周边，监测微生物污染风险，侧重温度敏感区域沉降菌密度变化

3.缓冲液制备区：中等洁净区（ISO7-8），检测原料称量点沉降菌，关注湿度对菌落生长影响

4.纯化层析区：色谱柱操作区域，检测粉尘携带沉降菌，重点评估设备清洁残留

5.原辅料仓库区：存储区环境监控，检测温控点沉降菌，确保物料无交叉污染

6.QC实验室区：检测环境背景菌，重点监控试剂配制台沉降菌，避免假阳性干扰

7.人员更衣室：进出通道区域，检测更衣后沉降菌热点，评估人员卫生影响

8.走廊过道区：空气流动路径，长期沉降菌监控，分析气流组织有效性

9.设备维护区：大型设备运行位置，检测振动区沉降菌，关注维护活动微生物负荷

10.废物处理区：潜在污染源区域，高警戒沉降菌检测，侧重生物安全柜外沉降

检测方法

国际标准：

• ISO14698-1:2003生物污染控制通则沉降菌测试
• ISO14644-1:2015洁净室及相关环境沉降菌采样布局
• USP<1116>无菌环境微生物监控沉降法

国家标准：

• GB/T16293-2010沉降菌测试方法
• GB50457-2019医药工业洁净厂房设计规范沉降菌条款
• GB/T25915-2021洁净室及相关控制环境沉降菌监测

方法差异说明：ISO标准采用动态采样点随机分布，而GB标准指定固定网格布局；USP要求培养时间更长（真菌120小时），GB则基于48-72小时；ISO14644-1强调CFU/m³换算公式，GB直接使用CFU/皿限值。

检测设备

1.沉降培养皿：Φ90mm无菌皿（灭菌包装完整性99.9%）

2.恒温培养箱：BINDERKB115（温度范围20-60℃，精度±0.5℃）

3.菌落计数器：Scan®1200（自动计数分辨率0.01mm，精度99%）

4.高压灭菌器：GetingeGEB-120（容积120L，温度121℃，压力0.22MPa）

5.生物显微镜：OlympusCX43（放大倍数40-1000×，LED光源）

6.温湿度记录仪：Testo605-H1（湿度范围10-95%RH，精度±1%）

7.洁净工作台：ESCOAC2-4S1（气流速度0.45m/s，HEPA过滤效率99.99%）

8.离心机：Eppendorf5430R（最大转速15000rpm，温控范围-10-40℃）

9.振荡培养器：IKAHS501（频率范围50-500rpm，振幅20mm）

10.低温冰箱：HaierHRF-720（温度范围-20℃至-10℃，容积720L）

11.微量移液器：EppendorfResearchplus（量程0.1-1000μL，误差±0.5%）

12.生物安全柜：NuAireNU-637（ClassII型，气流下降速度0.5m/s）

13.数据记录器：HOBOMX1102（记录间隔1min，内存128MB）

14.pH测定仪：MettlerToledoSevenEasy（分辨率0.01pH，自动校准）

15.图像分析仪：NIS-Elements（软件版本5.3，菌落识别算法）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"生物制品生产区沉降菌试验"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。