单克隆抗体类药物细胞毒性分析

检测项目

细胞活力检测：

• 荧光染料排斥试验：存活率（≥90%）、死细胞计数（≤5%）
• MTT法：OD值（相对吸光度≥0.8）
• 台盼蓝染色：阳性细胞比例（<10%）

• AnnexinV/PI染色：早期凋亡率（≥15%）、晚期凋亡率（≥10%）
• Caspase-3活性测定：荧光强度（≥200RFU）

• PI染色流式法：G0/G1期占比（≥60%）、S期阻滞（≤20%）
• BrdU掺入检测：增殖指数（≥1.5）

• 光学显微镜观察：细胞皱缩率（≥30%）、空泡化程度（≤5级）
• 扫描电镜：膜结构完整性（表面光滑度≥90%）

• LDH释放试验：释放量（≤200U/L）
• 钙黄绿素AM染色：膜渗透率（<5%）

• ROS测定：荧光强度（≥150%基线）
• GSH含量分析：还原型谷胱甘肽（≥5nmol/mg蛋白）

• 彗星试验：尾距（≥20μm）
• γ-H2AX免疫荧光：阳性核比例（≥25%）

• ELISA检测：IL-6浓度（≥50pg/mL）、TNF-α水平（≥30pg/mL）
• 细胞因子阵列：释放谱差异（≥3倍变化）

• 细胞迁移试验：迁移率抑制（≥50%）
• 吞噬功能检测：吞噬指数（≤0.8）

• ATP含量测定：相对值（≤70%）
• JC-1染色：膜电位变化（红/绿比≥1.2）

检测范围

1.小鼠源性单克隆抗体：重点检测杂交瘤细胞产生的抗体对正常肝细胞的潜在毒性及交叉反应性

2.人源化IgG抗体：评估重组表达抗体对免疫细胞（如T细胞）的凋亡诱导效应

3.Fab片段药物：分析片段化抗体对肾小管上皮细胞的膜完整性影响

4.双特异性抗体：聚焦双靶点抗体对肿瘤细胞和正常成纤维细胞的细胞周期阻滞

5.ADC（抗体药物偶联物）：检测偶联毒素对骨髓干细胞的DNA损伤及氧化应激

6.抗肿瘤治疗性抗体：评估PD-1/PD-L1抑制剂对癌细胞活力及炎症因子释放的抑制

7.自身免疫疾病用抗体：侧重TNF-α拮抗剂对巨噬细胞功能及膜完整性的影响

8.重组CHO细胞表达抗体：检测表达产物对神经细胞的线粒体功能障碍和凋亡率

9.临床前候选抗体：全面分析早期药物对多器官细胞（如心肌细胞）的毒性谱

10.融合蛋白抗体：评估融合结构域对表皮细胞的形态学变化及迁移抑制

检测方法

国际标准：

• ISO10993-5医疗器械生物学评价-体外细胞毒性试验
• ASTME2523流式细胞术检测细胞凋亡标准方法
• USP<1033>生物反应性测试-体外法
• ICHS6(R1)生物技术产品安全性评价

• GB/T16886.5医疗器械生物学评价-体外细胞毒性试验
• GB/T14233.2医用输液、输血器具生物学试验方法
• GB/T27919生物制品细胞毒性检测规范
• GB/T39726重组蛋白类药物安全性评价指南

检测设备

1.流式细胞仪：BDFACSCantoII（检测通道：8色激光，流速：12μL/min）

2.倒置显微镜：NikonEclipseTi2（分辨率：0.22μm，放大倍率：1000X）

3.酶标仪：ThermoMultiskanGO（波长范围：340-850nm，精度：±0.01OD）

4.CO2培养箱：ThermoForma3111（温度控制：±0.1°C，CO2浓度：5%±0.2%）

5.离心机：Eppendorf5425R（转速范围：100-30,000rpm，容量：4x100mL）

6.PCR仪：Bio-RadCFX96（热循环精度：±0.1°C，通道数：96）

7.凝胶成像系统：Bio-RadChemiDocMP（灵敏度：0.1pgDNA，分辨率：4.2MP）

8.生物安全柜：EscoAirstreamAC2-4S1（风速：0.45m/s，HEPA过滤效率：99.99%）

9.超低温冰箱：ThermoForma900系列（温度范围：-86°C±1°C，容量：851L）

10.细胞计数仪：BeckmanCoulterVi-CELLXR（计数精度：±2%，速度：60样本/小时）

11.荧光显微镜：OlympusBX53（激发波长：365-647nm，相机分辨率：5MP）

12.电穿孔仪：Bio-RadGenePulserXcell（电压范围：10-3000V，脉冲宽度：0.1-99ms）

13.分光光度计：ShimadzuUV-2600i（波长精度：±0.3nm，扫描速度：800nm/min）

14.微孔板振荡器：ThermoMicroplateShaker（转速：100-1500rpm，振幅：3mm）

15.细胞培养瓶：CorningT-175（表面积：175cm²，材质：Borosilicate玻璃）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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