低温保存条件下细胞存活率测定

检测项目

细胞活力评估：

• 台盼蓝排除法：存活率百分比（参照ISO10993-5）、细胞计数偏差（±5%）
• 荧光染色法：FDA/PI活死细胞比（比值≥4:1）
• 钙黄绿素-AM测试：摄取效率（荧光强度变化率）

形态学分析：

• 显微镜观察：形态完整性评分（0-5级）、细胞贴壁率（≥80%）
• 电镜扫描：超微结构损伤指数（参照ASTMF2315）

膜完整性检测：

• LDH释放测定：酶活性单位（U/ml，阈值≤25）
• 膜通透性测试：碘化丙啶渗透率（%）

代谢活性测定：

• MTT还原试验：吸光度值OD570（变化率≤10%）
• ATP含量分析：浓度值（nM/mg蛋白，参照GB/T16886.5）

增殖能力评估：

• 克隆形成试验：成功率百分比（≥70%）
• BrdU掺入检测：增殖指数（S期细胞比例）

凋亡与坏死量化：

• AnnexinV/PI检测：早期凋亡率（≤15%）、晚期坏死率
• Caspase-3活性：荧光单位（RFU）

冷冻保护剂优化：

• DMSO毒性测试：浓度范围（0-10%v/v）、细胞存活率（≥90%）
• 渗透压影响：摩尔浓度偏差（±50mOsm/kg）

功能恢复验证：

• 贴壁能力测试：附着率百分比（≥85%）
• 分化效率检测：标志物表达量（Fold-change）

基因表达分析：

• qRT-PCR：相对表达量（Ct值差异≤1）、RNA完整性指数（RIN≥7）
• 转录组测序：偏差率（±5%）

蛋白质合成检测：

• WesternBlot：蛋白丰度（灰度值比）、磷酸化水平
• ELISA细胞因子分泌：浓度（pg/ml，检测限0.1pg/ml）

检测范围

1.哺乳动物细胞系：涵盖HEK293、HeLa等，重点检测冷冻复苏后生长曲线与形态稳定性

2.多能干细胞：iPSC及ESC类型，侧重未分化状态维持与定向分化效率验证

3.原代细胞：如肝细胞、神经元，核心评估冻存后代谢功能与药物响应

4.免疫细胞：T淋巴细胞、NK细胞，聚焦冻存后细胞毒性及增殖活性恢复

5.肿瘤细胞株：MCF-7、A549等，重点测试冻存后侵袭能力与基因突变稳定性

6.生殖细胞：精子细胞与卵母细胞，核心检测活力（WHO标准）及受精潜力

7.组织工程细胞：软骨细胞、成骨细胞，侧重冻存后基质沉积与生物相容性

8.微生物细胞：乳酸杆菌、酵母菌，重点评估存活率及发酵活性恢复

9.植物细胞：原生质体与悬浮细胞，核心测试冻存后再生能力与光合效率

10.血细胞衍生品：红细胞、血小板，聚焦冷冻后形态完整性与功能耐久性

检测方法

国际标准：

• ISO10993-5:2021医疗器械生物学评价-细胞毒性试验
• ASTMF2315-18细胞存活率测定标准方法
• ISO20391-2:2019细胞计数方法-流式细胞术

国家标准：

• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价-体外细胞毒性试验
• GB/T39730-2020细胞培养技术规范
• GB/T35823-2018干细胞通用要求

（方法差异包括：ISO标准侧重细胞膜完整性评估，GB标准强调代谢活性阈值；ASTM方法使用荧光染色，GB方法整合台盼蓝法；ISO冷冻程序要求-196°C保存，GB允许-80°C短期测试）

检测设备

1.倒置荧光显微镜：OlympusIX83型（分辨率0.22μm，荧光通道488/561nm）

2.流式细胞仪：BDFACSAriaIII型（激光波长488/640nm，检测限10^3细胞/ml）

3.酶标仪：BioTekSynergyH1型（波长范围200-1000nm，精度±0.005OD）

4.实时PCR仪：AppliedBiosystems7500型（温控精度±0.1°C，通道数6）

5.高速离心机：Eppendorf5430R型（最大转速15000rpm，容量6×50ml）

6.液氮储存系统：Taylor-WhartonCX系列（温度-196°C，容量50-500L）

7.CO2培养箱：ThermoScientificHeracell150i型（CO2控制±0.1%，温度范围+5-50°C）

8.电穿孔设备：Bio-RadGenePulserXcell型（电压范围50-3000V，脉冲宽度0.1-100ms）

9.冷冻干燥机：LabconcoFreeZone2.5L型（冷凝温度-84°C，真空度<100mTorr）

10.自动细胞计数仪：CountessIIFL型（聚焦精度0.1μm，检测速度<30秒）

11.超低温冰箱：ThermoScientificForma系列（温度-86°C，均匀性±3°C）

12.显微操作仪：EppendorfTransferManNK2型（移动精度0.1μm，最大负载500g）

13.生物安全柜：NuAireClassIITypeA2型（风速0.38m/s，HEPA过滤效率99.99%）

14.恒温水浴槽：JulaboF12型（控温范围-20-150°C，稳定性±0.01°C）

15.紫外分光光度计：ShimadzuUV-2600型（波段190-1100nm，带宽1nm）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"低温保存条件下细胞存活率测定"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。