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真菌DNA定量PCR特异性检测测定检测

  • 原创官网
  • 2025-07-30 20:16:12
  • 关键字:北检研究院,真菌DNA定量PCR特异性检测测定检测

相关:

概述:真菌DNA定量PCR特异性检测是一种分子生物学技术,基于实时荧光定量PCR(qPCR)方法,精确测定样品中目标真菌DNA的浓度。核心检测对象包括真菌特异基因片段(如JianCe区域),关键项目涵盖引物设计验证、扩增效率(90%-110%)、阈值循环(Ct值)定量、熔解曲线分析(Tm偏差±0.5℃)、特异性验证(非靶标真菌交叉反应阴性)及抑制物检测(如IPC对照)。该方法适用于环境、临床和工业样品,确保高灵敏度和低检测限(LOD可达10 copies/μL)。

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注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

因篇幅原因,CMA/CNAS证书以及未列出的项目/样品,请咨询在线工程师。

☌ 询价

检测项目

核酸提取质量评估:

  • DNA纯度检测:A260/A280比值(1.8-2.0)、A260/A230比值(>1.8)
  • 浓度测定:DNAyield(≥10ng/μL)、完整性评估(agarose凝胶电泳)
引物设计验证:
  • 特异性评估:BLAST比对相似度(<70%非靶标)、交叉反应测试(阴性对照)
  • 效率计算:标准曲线斜率(-3.6~-3.1,效率90%-110%)
PCR反应优化:
  • 退火温度测试:Tm值优化(50-65℃梯度)、引物浓度(0.1-0.5μM)
  • 模板量调整:DNA输入量(1-100ng)、抑制剂耐受性(内参基因Ct≤30)
特异性检测:
  • 靶标识别:熔解曲线峰值(单峰偏差±0.5℃)、非特异性扩增(无杂峰)
  • 交叉验证:多种真菌DNA对照(曲霉、念珠菌阴性反应)
敏感性评估:
  • 检测限确定:LOD(10copies/μL)、LOQ(100copies/μL)
  • 重复性测试:Ct值变异系数(CV≤5%)
定量标准曲线构建:
  • 标准品稀释:梯度浓度(10^1-10^7copies/μL)、R^2值(≥0.98)
  • 动态范围:线性范围(3-7logunits)、斜率和截距误差(±0.05)
扩增效率分析:
  • 效率计算:E=(10^{-1/slope}-1)×100%(90%-110%)
  • 偏差校正:标准曲线偏移补偿(参照ISO17822)
熔解曲线鉴定:
  • 峰值分析:Tm值(偏差±0.5℃)、峰宽(FWHM≤1℃)
  • 杂质检测:双峰或肩峰评估(无异常峰)
抑制物检测:
  • 内参控制:IPCCt值(≤30)、抑制率(<50%)
  • 样品处理:抑制剂去除效率(spike-in回收率≥80%)
质量控制参数:
  • 批间差异:质控样本CV(≤10%)、阴性对照(无扩增)
  • 数据报告:Ct值精度(小数点后两位)、扩增曲线阈值设定(auto或fixed)

检测范围

1.土壤环境样品:重点检测腐生真菌如曲霉DNA浓度,预防交叉污染和基质抑制

2.水源样本:监测水传播病原真菌如镰刀菌,侧重低丰度DNA提取和水质抑制物影响

3.临床组织样本:针对侵袭性真菌如念珠菌,强调DNA纯化和抑制剂去除以避免假阴性

4.食品及农产品:检测仓储霉菌如黄曲霉,重点在复杂基质中特异性识别和定量限优化

5.药品及辅料:筛查污染真菌如青霉,侧重于无菌样品DNA提取和低LOD验证

6.空气粉尘样本:分析空气传播真菌如黑曲霉,核心在于滤膜DNA回收率和扩增效率控制

7.工业材料:检测建材表面霉菌如链格孢,重点在表面采样DNA提取和抑制剂耐受性测试

8.化妆品及个人护理品:监控防腐剂耐受真菌如酵母,侧重乳化基质DNA纯化和特异性验证

9.植物病理样本:识别植物病原真菌如白粉菌,强调宿主DNA干扰排除和靶标富集

10.废水处理样本:量化污泥中真菌群落,核心在重金属抑制物检测和动态范围校准

检测方法

国际标准:

  • ISO22174:2005食品链微生物PCR检测通用要求(强调引物验证和抑制物控制)
  • ISO17822:2020体外诊断PCR性能验证(涵盖特异性测试和定量曲线构建)
  • CLSIMM03-A2分子诊断定量方法指南(要求扩增效率90%-110%和熔解曲线分析)
国家标准:
  • GB/T4789.26-2003食品微生物检验PCR方法(差异:比国际标准更注重样品前处理步骤)
  • GB/T34795-2017核酸定量PCR检测通则(差异:规定Ct值报告精度为0.1,而国际标准为整数)
  • GB/T38504-2020真菌检测PCR技术规范(差异:增加环境样品特异性验证要求)
(方法差异说明:国际标准如ISO强调全球统一验证协议,而国家标准如GB/T更侧重本地化样品类型和抑制物处理;ISO17822要求熔解曲线Tm偏差控制在±0.5℃,GB/T34795则允许±1℃阈值)

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪:QuantStudio7Pro(检测通道6个,温控精度±0.1℃)

2.核酸浓度测定仪:NanoDropLitePlus(测量范围2ng/μL-15000ng/μL,精度±1%)

3.高速冷冻离心机:Eppendorf5425R(转速14000rpm,温控范围-20℃至40℃)

4.自动化核酸提取系统:KingFisherFlex(通量96样本,回收率≥95%)

5.凝胶电泳仪:Bio-RadPowerPacBasic(电压范围10-300V,凝胶槽尺寸10cm×10cm)

6.超低温冰箱:ThermoScientificTSX(温度范围-86℃,容量700L)

7.微量分光光度计:DeNovixDS-11FX(波长范围190-840nm,样品量0.5-2μL)

8.PCR板离心机:VWRMicro-Centrifuge(转速2500rpm,容量24孔板)

9.生物安全柜:EscoAirstreamAC2-4S1(洁净度ClassII,风速0.3-0.5m/s)

10.恒温混匀仪:EppendorfThermomixerC(温度范围-10℃至100℃,振荡速度300-2000rpm)

11.纯水系统:MerckMilli-QIQ7000(产水电阻率18.2MΩ·cm,流量2L/min)

12.荧光显微镜:OlympusBX53(放大倍数40-1000×,荧光滤镜组)

13.数据记录系统:QuantStudioSoftwarev1.3(支持实时扩增曲线分析,数据导出格式CSV)

14.超声波破碎仪:QsonicaQ700(功率700W,频率20kHz)

15.恒温培养箱:MemmertIN53(温度范围0-70℃,精度±0.1℃)

北检(北京)检测技术研究院【简称:北检院】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

以上是与"真菌DNA定量PCR特异性检测测定检测"相关的简单介绍,具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。

    材料检测服务

    专业分析各类金属、非金属材料的成分、结构与性能,提供全面检测报告和解决方案。包括金属材料力学性能测试、高分子材料老化试验、复合材料界面分析等。

    化工产品分析

    精准检测各类化工产品的成分、纯度及物理化学性质,确保产品质量符合国家标准。服务涵盖有机溶剂分析、催化剂表征、高分子材料分子量测定等。

    环境检测服务

    提供土壤、水质、气体等环境检测服务,助力环境保护与污染治理,共建绿色家园。包括VOCs检测、重金属污染分析、水质生物毒性测试等。

    科研检测认证

    凭借专业团队和先进设备,致力于为企业研发、质量控制及市场准入提供精准可靠的技术支撑,助力品质提升与合规发展。