转基因成分分子鉴定

检测项目

转基因筛查检测：

• 启动子检测：CaMV35S序列检出限（≥95%特异性），NOS终止子检出限（参照ISO21569）
• 筛选基因检测：nptII抗性基因（阳性阈值Ct值≤35），hpt基因（灵敏度0.01%）

• 内参基因检测：lectin基因（大豆特异性，扩增效率90%-110%），zein基因（玉米特异性，参照GB/T19495.5）
• 物种标志物分析：SSR标记多态性（等位基因数≥5），SNP位点验证（错误率≤0.1%）

• 事件特异性检测：MON810事件（边界序列分析，覆盖度≥99.9%），GT73事件（junction序列验证，检出限0.05%）
• 多重事件筛查：组合引物扩增（多达10个事件并行），事件交叉验证（假阳性率≤0.01%）

• 终点PCR：扩增片段长度（100-500bp），凝胶电泳分辨率（2%琼脂糖凝胶）
• 巢式PCR：二次扩增灵敏度（检测限0.001%），污染控制（阴性对照要求）

• real-timePCR：相对定量（ΔΔCt法，RSD≤5%），绝对定量（标准曲线R²≥0.99）
• 探针设计：TaqMan探针淬灭效率（FAM/BHQ1系统），SYBRGreen熔解曲线（Tm值偏差±0.5℃）

• WesternBlot：目标蛋白分子量（kDa范围验证），抗体结合效率（ECL显色灵敏度pg级）
• ELISA检测：定量范围（0.1-100ng/mL），交叉反应率（≤1%）

• Sanger测序：读长（≥800bp），序列比对一致性（≥99.5%）
• NGS验证：覆盖深度（30x），变异检测限（AF≥5%）

• 微阵列芯片：探针密度（10^6点/cm²），信号强度阈值（SNR≥3）
• SouthernBlot：片段大小分离（0.5-20kb），杂交特异性（背景噪声≤5%）

• 内参校准：GAPDH基因稳定性（Ct值波动±1），RNA质量检测（RIN≥7.0）
• 阴性/阳性对照：阴性样本Ct值（≥40），阳性样本回收率（90%-110%）

• 检出限验证：低浓度样本重复性（CV≤10%），假阴性率（≤0.1%）
• 特异性测试：非目标序列干扰（抑制率≤5%），基质效应补偿（参照ISO21570）

检测范围

1.大豆及其制品：涵盖原料大豆、豆油及豆腐，重点检测RoundupReady事件（如GTS40-3-2）基因稳定性

2.玉米及衍生品：包括籽粒、淀粉及饲料，侧重MON810和Bt11事件筛查及定量分析

3.水稻样本：涉及糙米、精米及米粉，核心检测GoldenRice事件（如GR2E）β-胡萝卜素基因

4.棉花产品：棉籽、棉油及纺织品，聚焦Bollgard事件（如MON531）杀虫蛋白表达验证

5.油菜籽及油：原料种子和加工油品，重点鉴定GT73和RF3事件除草剂耐受性

6.番茄及加工食品：鲜果、酱料及罐头，检测延迟成熟事件（如FLAVRSAVR）基因沉默效应

7.小麦制品：面粉、面包及面条，筛查转基因小麦事件（如HB4）耐旱基因整合

8.马铃薯产品：鲜薯、薯片及淀粉，侧重Amflora事件支链淀粉合成酶分析

9.饲料原料：豆粕、玉米青贮及混合饲料，检测复合转基因成分及交叉污染

10.环境样本：土壤、水体及花粉，监控转基因漂流事件（如玉米MON88017）生态影响

检测方法

国际标准：

• ISO21569:2005转基因检测核酸提取方法（涵盖CTAB法差异）
• ISO21570:2005定量PCR检测转基因成分（灵敏度对比国家标准高0.05%）
• ISO24276:2006检测策略与验证要求（包括筛查与确证两阶段流程）

• GB/T19495.1-2004转基因检测通用要求（核酸提取步骤与国际标准一致）
• GB/T19495.3-2004定性PCR检测方法（扩增条件差异：退火温度±2℃）
• GB/T19495.5-2018定量实时荧光PCR方法（检测限设定为0.1%，低于国际0.05%）

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：QuantStudio5（温度均一性±0.1℃，通道数6）

2.核酸提取工作站：KingFisherFlex（通量96样本/小时，回收率≥95%）

3.新一代测序仪：IlluminaNovaSeq6000（通量20Tb/run，读长2x150bp）

4.电泳系统：Bio-RadPowerPac（电压范围50-300V，凝胶尺寸20cm）

5.紫外分光光度计：NanoDropOne（检测限0.2ng/μL，波长260/280nm）

6.离心机：Eppendorf5430R（转速15000rpm，温控±1℃）

7.恒温培养箱：MemmertINC108（温度范围10-70℃，稳定性±0.2℃）

8.凝胶成像系统：ChemiDocMP（分辨率5M像素，荧光滤光片6种）

9.蛋白纯化仪：ÄKTApure（流速0.001-100mL/min，压力上限5MPa）

10.生物分析仪：Agilent2100（RNA/DNA完整性检测，RIN精度0.1）

11.微波炉：CEMDiscover（功率1200W，温度控制±2℃）

12.水浴锅：JulaboSW22（温度精度±0.1℃，容量20L）

13.低温冰箱：ThermoScientificForma（温度-80℃，容积800L）

14.振荡器：IKAKS4000（转速50-1500rpm，振幅20mm）

15.显微镜：OlympusBX53（放大倍数1000x，分辨率0.2μm）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"转基因成分分子鉴定"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。