核酸样品处理方法试验

核酸样品处理方法试验专注于评估核酸提取、纯化及定量过程的关键参数,包括浓度精度、纯度比值、完整性指数、污染物残留等检测要点。基于国际和国家标准,确保样品质量符合下游应用要求,涵盖多种生物样品类型和设备方法。

原创阅读 02025-08-28工程师CMACNASISO高新技术企业

检测项目

1.核酸浓度测定:使用紫外分光光度法,浓度范围1ng/μLto1000ng/μL,测量精度±5%,线性范围R²≥0.99

2.纯度评估:A260/A280比值标准1.8-2.0,A260/A230比值2.0-2.2,偏差允许±0.1

3.完整性检测:通过琼脂糖凝胶电泳,条带清晰无降解,28S/18SrRNA比值≥1.8forRNA,DNA片段大小分布均匀

4.提取效率:回收率≥90%,基于内标spikedcontrol,变异系数CV≤5%

5.蛋白质污染检测:残留蛋白质≤0.1μg/μL,使用BCA法,检测下限0.05μg/μL

6.盐分残留测定:电导率≤10μS/cm,离子色谱法检测,钠离子浓度≤5mM

7.酶抑制测试:PCR扩增效率≥90%,Ct值偏差±1cycle,使用标准模板

8.pH值测定:范围7.0-8.5,使用pH电极法,精度±0.1units

9.片段大小分布:用于NGS应用,平均片段大小200-500bp,偏差±50bp,通过生物分析仪评估

10.微生物污染检测:无菌测试,37°C培养24小时无细菌生长,内毒素水平≤0.1EU/μL

11.氧化损伤评估:8-OHdG含量≤0.1ng/μgDNA,通过HPLC-MS/MS法

12.储存稳定性测试:-80°C储存30天,浓度变化≤10%,完整性无显著降解

检测范围

1.人类全血样品:用于基因组DNA提取,抗凝血处理,血红蛋白残留≤0.01%

2.动物组织样品:如小鼠肝脏组织,用于RNA提取,RNase污染控制,完整性指数RIN≥7

3.植物叶片样品:用于DNA和RNA分析,多酚杂质去除效率≥95%,色素残留Absorbance≤0.05at320nm

4.细菌培养物:用于质粒DNA提取,拷贝数检测下限10²copies/μL,内毒素≤1EU/μg

5.病毒颗粒样品:如流感病毒RNA,提取效率≥80%,Ct值≤30inqPCR

6.法医拭子样品:用于STR分析,DNAyield≥0.5ng/μL,抑制剂检测无假阴性

7.环境水样:用于微生物DNA检测,过滤体积100mL,回收率≥70%,PCR抑制物去除

8.细胞系培养物:用于转录组研究,细胞数10⁶cells,RNAintegritynumberRIN≥8

9.古生物样品:如化石DNA,低浓度处理≥0.1ng/μL,contaminationcontrol≤0.1%

10.合成寡核苷酸:用于质量控制,序列准确性100%,纯度HPLC≥95%

11.唾液样品:用于快速提取,yield≥10ng/μL,mucin残留≤0.5%

12.粪便样品:用于microbiome研究,inhibitorremoval≥90%,DNAconcentration≥5ng/μL

检测方法

国际标准:

ISO22174:2005Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs—Polymerasechainreaction(PCR)forthedetectionoffood-bornepathogens—Generalrequirementsanddefinitions

ISO20395:2019Biotechnology—Requirementsforevaluatingtheperformanceofquantificationmethodsfornucleicacidtargetsequences—qPCRanddPCR

ASTME2886-12JianCeGuideforExtractionofDNAfromEnvironmentalSamples

ISO21571:2005Foodstuffs—Methodsofanalysisforthedetectionofgeneticallymodifiedorganismsandderivedproducts—Nucleicacidextraction

ISO20184-1:2018Molecularbiomarkeranalysis—Extractionofnucleicacids—Part1:Generalrequirementsanddefinitions

ASTME3022-18JianCeGuideforNucleicAcidSequencingforTaxonomicIdentificationofMicroorganisms

ISO17822:2020Invitrodiagnostictestsystems—Nucleicacidamplification-basedexaminationproceduresfordetectionandidentificationofmicrobialpathogens—Laboratoryqualitypractice

ISO13073-1:2012Shipsandmarinetechnology—Riskassessmentforanti-foulingsystemsonships—Part1:Generalprinciplesandmethodology(adaptedfornucleicacidsampling)

ASTME3130-18JianCePracticeforExtractionofDNAfromEnvironmentalSamplesforSubsequentMolecularAnalysis

ISO22949-1:2020Molecularbiomarkeranalysis—Methodsforthedetectionofspecificnucleicacidsequences—Part1:Generalrequirementsanddefinitions

国家标准:

GB/T19495.1-2018转基因产品检测核酸提取纯化方法

GB/T37871-2019病原微生物核酸检测试剂盒质量评价通则

GB/T34796-2017核酸浓度测定紫外分光光度法

GB/T35538-2017DNA提取纯化试剂盒通用技术要求

GB/T39100-2020基因测序数据质量评价规范

GB/T30989-2014核酸分子杂交技术规范

GB/T37872-2019病原微生物核酸提取试剂盒质量评价要求

GB/T34797-2017RNA完整性检测电泳法

GB/T35539-2017核酸样品储存和运输规范

GB/T39101-2020高通量测序数据质量control指南

检测设备

1.紫外分光光度计:型号UV-1800.功能测量核酸浓度和纯度,波长范围200-800nm,精度±0.001Abs

2.荧光定量PCR仪:型号QPCR-200.功能实时定量核酸,温度控制精度±0.1°C,通道数4-6

3.电泳系统:型号GEL-300.功能检测核酸完整性,电压范围0-300V,凝胶尺寸10cmx10cm

4.高速离心机:型号CENT-5000.功能核酸沉淀和纯化,最大转速15000rpm,温度控制4-40°C

5.自动化核酸提取仪:型号AUTO-EXT.功能高通量提取,通量96samples/run,交叉污染率≤0.1%

6.微孔板阅读器:型号PLATE-READ.功能酶标assay,检测模式absorbanceandfluorescence,波长范围200-1000nm

7.测序仪:型号SEQ-100.功能NGS测序,读长upto300bp,errorrate≤0.1%

8.pH计:型号PH-101.功能测量pH值,范围0-14,精度±0.01

9.超低温冰箱:型号FREEZE-80.功能样品储存,温度-80°C,稳定性±2°C

10.生物安全柜:型号BSC-Ⅱ.功能无菌操作,气流速度0.3-0.5m/s,HEPAfiltration

北检(北京)检测技术研究院【简称:北检院】

  • 报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
  • 检测周期:7~15工作日,可加急。
  • 资质:旗下实验室拥有CMA/CNAS/ISO资质。
  • 标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
  • 非标测试:支持定制化试验方案。
  • 售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

QUALIFICATIONS

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