小干扰 RNA（siRNA）沉默效率检测

检测项目

1.转染效率检测：使用荧光标记siRNA，转染率≥90%，荧光强度测量误差≤5%

2.mRNA表达水平定量：实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析，Ct值变化计算沉默效率，效率≥70%，引物特异性100%

3.蛋白表达抑制率评估：Westernblot检测，蛋白水平降低≥60%，灰度值分析精度±2%

4.细胞活力测试：MTT法或CCK-8assay，细胞存活率≥80%，IC50值计算误差±0.5μM

5.脱靶效应分析：高通量测序或微阵列，脱靶基因表达变化≤10%，置信度95%

6.siRNA稳定性检验：储存条件-20°C，稳定性≥6个月，降解率≤5%

7.浓度测定：紫外分光光度法，浓度精度±5ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0

8.纯度检测：高效液相色谱（HPLC）分析，纯度≥95%，杂质峰面积≤5%

9.尺寸分布测量：动态光散射（DLS），粒径范围20-25nm，多分散指数≤0.2

10.功能验证实验：体外抑制assay，IC50值≤50nM，重复性误差±10%

11.细胞内定位观察：荧光显微镜成像，定位准确性≥95%，图像分辨率0.1μm

12.长期沉默效果监测：时间点检测至72小时，沉默持续性≥50%，衰减率≤5%/小时

检测范围

1.合成双链siRNAoligos：长度21-23bp，修饰类型如2'-O-methyl，用于基础研究

2.脂质体转染试剂复合物：粒径100-200nm，包封率≥85%，适用于细胞转染

3.哺乳动物细胞系：包括HeLa、HEK293、A549等，转染适应性≥90%viability

4.动物模型组织样本：如小鼠肝脏、肿瘤组织，取样量≥10mg，保存条件-80°C

5.临床血液样本：外周血单核细胞（PBMC），细胞数≥1×10^6/mL，无溶血

6.定制siRNA序列：针对特定基因设计，沉默效率≥70%，无脱靶设计

7.高通量筛选板：96孔或384孔板，孔间变异系数≤5%，用于药物发现

8.体外转录siRNA：RNA纯度≥90%，适用于无细胞系统

9.化学修饰siRNA：如胆固醇conjugates，增强稳定性，血清半衰期≥24小时

10.siRNA文库：全基因组覆盖，库容量≥10,000sequences，错误率≤0.1%

11.植物组织样本：如拟南芥叶片，提取RNA完整性值（RIN）≥7.0

12.微生物细胞：细菌或酵母，转染效率调整至物种特异性条件

检测方法

国际标准：

ISO20395:2019分子生物学检测定量方法验证通则

ASTME2554-18核酸纯度评估标准指南

ISO10993-5:2021医疗器械生物学评价细胞毒性试验

ASTME3133-18高通量筛选数据质量评估

ISO20186-1:2019分子体外诊断检验程序

ASTME2887-19流式细胞术数据报告标准

ISO21571:2019食品链微生物学核酸提取方法

ASTME3024-18实时荧光定量PCR性能验证

ISO18184:2019纺织品抗病毒活性测定（适配核酸检测）

ASTME3218-20RNA干扰效率计算标准

国家标准：

GB/T37871-2019核酸提取纯化试剂盒质量要求

GB/T34796-2017定量PCR检测方法通则

GB/T39126-2020细胞培养技术规范

GB/T39244-2020RNA纯度检测紫外分光光度法

GB/T39769-2021分子生物学实验细胞转染技术规范

GB/T39901-2021基因表达分析微阵列法

GB/T40246-2021生物样品中RNA完整性检测

GB/T40982-2021蛋白质印迹检测方法

GB/T41366-2022体外诊断试剂稳定性评价

GB/T42218-2022高通量测序数据质量控标准

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：型号QPCR-2000，温度控制精度±0.1°C，检测通道数6个，Ct值分辨率0.01

2.流式细胞仪：型号FCM-500，激光波长488nm和640nm，检测速度10,000cells/s，荧光灵敏度100MESF

3.Westernblot成像系统：型号WB-800，化学发光检测动态范围4logs，像素分辨率5μm

4.紫外分光光度计：型号UVSpec-300，波长范围190-800nm，吸光度精度±0.001AU，样品体积1μL

5.高效液相色谱系统：型号HPLC-600，C18柱分离，流速精度±0.01mL/min，检测波长260nm

6.动态光散射仪：型号DLS-400，粒径测量范围0.3nm-10μm，温度控制20-90°C，精度±0.1°C

7.荧光显微镜：型号FM-100，物镜放大倍数10×-100×，CCD相机分辨率2048×2048像素，激发光波长范围400-700nm

8.细胞培养箱：型号CCInc-350，温度控制37°C±0.5°C，CO2浓度5%±0.1%，湿度95%±2%

9.高通量测序仪：型号NGS-900，读长长度150bp，通量10Gb/run，错误率≤0.1%

10.微孔板读数器：型号MPR-700，检测模式吸光度和荧光，波长范围200-1000nm，孔数兼容96和384孔板

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"小干扰 RNA（siRNA）沉默效率检测"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检检测技术研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。