检测项目

1.总甲基腺苷含量测定：采用HPLC-MS/MS法测定样本中2'-O-甲基腺苷（Am）、N6-甲基腺苷（m6A）等总含量，定量限0.1ng/mL

2.m6A修饰位点分析：通过MeRIP-seq技术定位RNA分子中N6-甲基腺苷修饰位点，分辨率达单碱基水平

3.动态修饰水平监测：基于LC-QTOF系统实现5-甲基胞苷（m5C）与m6A的同步检测，线性范围0.05-50μg/mL

4.同位素内标定量：使用[13C5]-m6A同位素标记物进行绝对定量分析，回收率≥95%

5.组织特异性表达谱：通过NanoStringnCounter系统构建甲基化修饰组织分布图谱，检测灵敏度1fg/μL

检测范围

1.生物样本：血清/血浆游离RNA、组织切片总RNA、外泌体RNA样本

2.药品原料：mRNA疫苗原液、寡核苷酸药物中间体、核酸佐剂

3.食品基质：功能食品中核苷酸添加剂、婴幼儿配方奶粉RNA成分

4.环境样本：水体中微生物胞外RNA污染物、气溶胶颗粒吸附核酸

5.科研试剂：CRISPR基因编辑产物、体外转录RNA标准品

检测方法

1.GB/T37868-2019《RNA甲基化测序技术规范》规定RNA提取及文库构建流程

2.ISO21427-2:2006《水质-RNA病毒检测》前处理方法适用于环境样本预处理

3.ASTME3066-18《核酸质谱定量标准指南》规范LC-MS系统校准程序

4.GB/T39132-2020《外泌体RNA检测通则》明确超速离心分离技术要求

5.ISO20395-2021《生物技术-核酸定量要求》规定qPCR验证标准曲线建立方法

检测设备

1.ThermoScientificTSQAltis三重四极杆质谱仪：配备APCI离子源，质量精度＜3ppm

2.Agilent1260InfinityII液相色谱仪：配置ZORBAXRRHDEclipsePlusC18色谱柱（2.1100mm,1.8μm）

3.BeckmanCoulterOptimaXPN-100超速离心机：最大转速100,000rpm，用于外泌体分离

4.IlluminaNovaSeq6000测序系统：支持MeRIP-seq双端150bp读长测序

5.WatersACQUITYUPLCH-Class系统：配备PDA检测器，流速范围0.001-5mL/min

6.EppendorfMastercyclerX50sPCR仪：支持梯度温控程序（30-99℃0.1℃）

7.MalvernNanoSightNS300纳米颗粒分析仪：动态光散射技术测定外泌体粒径（10-2000nm）

8.PerkinElmerJANUSG3工作站：自动化移液系统处理96/384孔板样本

9.BrukertimsTOFPro质谱仪：捕获离子淌度分离技术提升异构体分辨能力

10.Bio-RadChemiDocMP成像系统：化学发光法验证Northernblot结果