检测项目
1.酶活性测定:测定单位时间内硫代乙酰胆碱水解量(ΔA412/min),反应体系含0.1mMDTNB
2.抑制剂筛选:测定IC50值(浓度范围0.1nM-100μM),采用双对数曲线拟合
3.米氏常数测定:底物浓度梯度0.05-5mM乙酰硫代胆碱碘化物
4.温度稳定性:测试20-50℃范围内酶活保留率(间隔5℃)
5.pH耐受性:测定pH6.0-8.5磷酸缓冲体系中相对活性变化
检测范围
1.生物样本:脑组织匀浆液、红细胞膜提取物
2.农药残留:有机磷类(毒死蜱、敌敌畏)、氨基甲酸酯类(克百威)
3.药物制剂:阿尔茨海默病治疗药物(多奈哌齐、加兰他敏)
4.环境样本:土壤浸出液、水体悬浮颗粒物
5.工业原料:农药中间体、神经毒剂模拟物
检测方法
1.Ellman法:ISO11816-1:2013规定比色法流程(412nm波长)
2.荧光分析法:ASTME2931-13采用乙酰基吲哚酚为底物(激发/发射=360/450nm)
3.电化学法:GB/T38132-2019碳纳米管修饰电极检测硫代胆碱氧化电流
4.放射化学法:ISO21427-2:2006使用[H]乙酰胆碱同位素标记
5.流动注射分析:GB/T37837-2019在线混合系统(流速0.8mL/min)
检测设备
1.UV-2600i分光光度计(岛津):波长精度0.3nm,温控比色槽(250.1℃)
2.SynergyH1酶标仪(BioTek):支持动力学模式(间隔15s读数)
3.1260InfinityIIHPLC系统(安捷伦):配备荧光检测器(柱温箱30℃)
4.CHI760E电化学工作站(辰华):三电极体系(工作电极玻碳电极)
5.MultiTempIII恒温循环器(Amersham):控温范围4-99℃0.5℃
6.MS3涡旋振荡器(IKA):转速100-2500rpm可调(定时功能)
7.PB-10pH计(Sartorius):复合电极精度0.01pH
8.Centrifuge5424R离心机(Eppendorf):最大转速15000g(制冷型)
9.Milli-QReference纯水系统:产水电阻率18.2MΩcm@25℃
10.Labconco真空冻干机:冷阱温度-84℃,真空度<0.120mBar