检测项目

1.病毒抗原检测：采用ELISA法测定样本中MHV-N蛋白浓度，灵敏度≥5pg/mL

2.抗体滴度测定：间接免疫荧光法（IFA）检测IgG/IgM抗体效价（1:40为临界值）

3.核酸检测：实时荧光定量PCR靶向MHV-JHM株S基因（引物序列：F:5'-CTGGATGCTGGTATTGCT-3',R:5'-GTCATCCACAGCCATCTT-3'）

4.病毒分离培养：BHK-21细胞系接种观察CPE效应（72h内判定）

5.病理学检查：肝组织HE染色评估典型坏死灶（直径≥50μm为阳性）

检测范围

1.实验动物样本：SPF级小鼠血清/粪便/肝组织匀浆（保存温度≤-70℃）

2.细胞培养物：干细胞系/肿瘤细胞系传代培养物（需排除支原体污染）

3.生物制品：单克隆抗体生产用腹水/疫苗原液（取样量≥200μL）

4.实验器材：IVC笼具表面拭子/垫料浸出液（按GB/T27416采样）

5.基因工程产物：重组病毒载体构建中间体（需灭活处理）

检测方法

1.ISO15189:2012《医学实验室质量和能力要求》病毒分离规范

2.GB/T14926.22-2001《实验动物小鼠肝炎病毒检验方法》血清学标准

3.ASTMF2315-18《实验动物病原体PCR检测通用指南》

4.WHO《实验室生物安全手册》第三版BSL-2操作规范

5.JJF1815-2020《实时荧光定量PCR仪校准规范》

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：RocheLightCycler480II（温控精度0.1℃）

2.全自动酶标仪：ThermoMultiskanSkyHigh（波长范围340-850nm）

3.生物安全柜：ESCOAirstreamClassIITypeB2（风速0.45m/s20%）

4.倒置显微镜：OlympusIX73-P2F（相位差400观察CPE）

5.超速离心机：BeckmanCoulterOptimaXPN-100（最大转速100,000rpm）

6.电泳系统：Bio-RadPowerPacBasic（电压范围10-300VDC）

7.冷冻切片机：LeicaCM1950（切片厚度1-50μm可调）

8.核酸提取仪：MagCoreHF16Plus（磁珠法通量16样本/批次）

9.CO₂培养箱：PanasonicMCO-170AICUV（温度波动0.3℃）

10.扫描电镜：HitachiRegulus8230（分辨率1.0nm@15kV）