检测项目

1.病毒核酸检测：采用RT-qPCR技术测定Ct值范围（18-35），灵敏度达10copies/μL

2.抗原蛋白定量：ELISA法检测F/HN蛋白浓度阈值≥50pg/mL

3.抗体中和效价：空斑减少试验测定中和抗体滴度≥1:160

4.病毒滴度测定：TCID50法计算半数感染量≥10^6.0/mL

5.细胞病变效应：显微镜观察合胞体形成率＞70%

检测范围

实验动物样本：小鼠/大鼠肺组织匀浆液及血清样本

细胞培养物：vero细胞/MDCK细胞培养上清液及裂解液

生物制品原料：胎牛血清、细胞培养基中病毒污染筛查

疫苗产品：灭活疫苗残留感染性病毒验证

临床样本：呼吸道分泌物中病原体鉴别诊断

检测方法

ISO15189:2022：医学实验室病毒核酸检测质量规范

ASTME2888-19：细胞培养中病毒清除验证标准指南

GB/T19438.2-2004：禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法扩展应用

GB/T14926.22-2001：实验动物仙台病毒ELISA诊断技术规程

EP5.2.3：欧洲药典病毒安全性验证技术要求

检测设备

ABI7500实时荧光定量PCR仪：TaqMan探针法核酸扩增分析系统

BioTekSynergyH1酶标仪：450nm波长抗原抗体反应吸光度测定

Eppendorf5424R高速离心机：病毒颗粒沉淀（12,000g/30min）

ThermoScientific1300系列生物安全柜：A2型病原体操作防护系统

NikonEclipseTS2倒置显微镜：100物镜观察细胞病变效应(CPE)

MemmertCO2培养箱：37℃恒温维持MDCK细胞病毒感染活性

Bio-RadPowerPacBasic电泳仪：病毒核酸琼脂糖凝胶电泳验证(100V/30min)

Tanon3500凝胶成像系统：EB染色条带灰度值分析系统