免疫印迹试验

免疫印迹试验(WesternBlot)是一种基于抗原-抗体特异性结合原理的蛋白质分析技术,广泛应用于生物医学研究与临床诊断领域。该技术通过电泳分离蛋白样品、转膜固定及特异性抗体标记等步骤,实现对目标蛋白的定性与半定量检测。核心要点包括转膜效率控制、抗体特异性验证及信号显影标准化流程。

原创阅读 142025-04-19工程师CMACNASISO高新技术企业

检测项目

1. 蛋白质分子量测定:SDS-PAGE凝胶电泳分离(4-20%梯度胶),Marker参照范围10-250 kDa

2. 特异性抗体验证:一抗效价≥1:1000,二抗交叉反应性≤5%

3. 转膜效率评估:PVDF膜孔径0.45μm,转印电流300mA/90min

4. 信号显影分析:化学发光法检测限≤1pg/μL

5. 定量重复性验证:CV值≤15%(n=3)

检测范围

1. 重组蛋白制品:大肠杆菌/哺乳动物细胞表达系统产物

2. 细胞裂解液样本:总蛋白浓度≥1μg/μL

3. 血清/血浆样本:IgG类抗体特异性检测

4. 组织匀浆液:脑/肝/肾等哺乳动物组织提取物

5. 病毒蛋白组分:包膜蛋白/核衣壳蛋白分离鉴定

检测方法

ISO 19642:2020《蛋白质印迹分析通用技术要求》

GB/T 34777-2017《免疫印迹法测定抗体效价》

ASTM E3106-18《Western Blot定量分析标准指南》

YY/T 1180-2021《免疫组化及免疫印迹试剂盒》

ISO 15189:2022《医学实验室质量与能力要求》

检测设备

1. Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra电泳系统:4通道垂直电泳槽

2. Trans-Blot Turbo转印系统(货号1704150):7分钟快速转膜

3. Tanon 5200化学发光成像仪:CCD分辨率600万像素

4. Eppendorf Centrifuge 5430R:最大转速15,300rpm

5. Thermo Scientific Pierce BCA蛋白定量试剂盒(货号23225)

6. LI-COR Odyssey CLx双色红外成像系统:680/800nm双通道

7. Amersham Hybond-P PVDF膜(货号10600023)

8. GE Healthcare AKTA pure蛋白纯化系统

9. Beckman Coulter JS-1060光密度扫描仪

10. Sartorius Quintix电子天平(精度0.01mg)

北检(北京)检测技术研究院【简称:北检院】

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