检测项目

1. 端粒酶活性定量分析（TRAP法）：测定范围0.01-100 U/mL，灵敏度≤0.005 U/mL

2. 端粒酶RNA组分（hTR）表达量：qPCR法检测阈值Ct值≤35，动态范围10^1-10^7 copies/μL

3. 催化亚基hTERT蛋白浓度：ELISA法线性范围0.1-50 ng/mL，回收率85-115%

4. 抑制剂半数抑制浓度（IC50）：梯度浓度设置0.1 nM-100 μM，重复性CV≤15%

5. 热稳定性测试：37℃/25℃条件下活性保留率测定（t1/2≥4h）

检测范围

1. 永生细胞系（HEK293T、HeLa等）裂解液样本

2. 临床肿瘤组织穿刺样本（冷冻保存≤-80℃）

3. 重组端粒酶制剂（纯度≥95%）

4. 小分子抑制剂候选化合物（DMSO溶解浓度≤0.1%）

5. 基因编辑细胞模型（CRISPR敲除效率≥70%）

检测方法

ISO 18185:2017《体外端粒酶活性测定-TRAP银染法》

GB/T 37872-2019《核酸扩增法检测端粒酶RNA组分技术要求》

ASTM E2935-17《药物筛选用酶活性抑制试验标准指南》

GB/T 34820-2017《蛋白质免疫印迹法通则》

ISO 10993-18:2020《生物材料化学成分表征》

检测设备

1. Thermo Fisher QuantStudio 6 Pro：实时荧光定量PCR系统（支持TaqMan探针法）

2. Bio-Rad ChemiDoc MP：化学发光成像系统（CCD分辨率2048×2048）

3. Agilent 2100 Bioanalyzer：生物分析仪（RNA完整性指数RIN≥7.0）

4. PerkinElmer EnVision：多功能酶标仪（吸光/荧光/化学发光三模）

5. Eppendorf Mastercycler X50：梯度PCR仪（温控精度±0.1℃）

6. Beckman Coulter Optima XPN-100：超速离心机（最大转速100,000×g）

7. Malvern Zetasizer Nano ZS：动态光散射仪（粒径测量范围0.3 nm-10 μm）

8. Waters ACQUITY UPLC H-Class：超高效液相色谱（色谱柱BEH300 C4 1.7μm）

9. Miltenyi Biotec MACSQuant Analyzer 10：流式细胞仪（10色荧光检测）

10. Sartorius Cubis II MSA225S：微量天平（称量精度0.01 mg）