检测项目

1. 酶活性定量：测定单位时间内甲基基团转移速率（U/mg），采用放射性标记法或比色法

2. 底物特异性分析：评估对CpG/非CpG序列的催化效率（kcat/Km值）

3. 动力学参数测定：包括Km值（0.5-5 μM）、Vmax（10-100 nmol/min）及最适pH范围（7.4-8.2）

4. 抑制剂筛选：测定IC50值（nM至μM级）及抑制类型（竞争性/非竞争性）

5. 热稳定性测试：通过差示扫描量热法测定Tm值（45-60℃）

检测范围

1. 生物样本：人/动物血清、组织匀浆液及细胞裂解液

2. 重组蛋白制品：大肠杆菌/昆虫细胞表达系统生产的DNMT1/DNMT3A/DNMT3B

3. 药物候选物：小分子抑制剂/激活剂及其代谢产物

4. 体外诊断试剂：甲基化检测试剂盒核心组分

5. 科研材料：CRISPR基因编辑模型细胞的DNMT表达水平

检测方法

1. ISO 20186-1:2016 分子体外诊断检验标准预检程序

2. GB/T 34796-2017 核酸甲基化检测通用技术要求

3. ASTM E3066-16 酶活性测定的标准指南

4. ISO/IEC 17025:2017 检测实验室能力通用要求

5. GB/T 27417-2017 合格评定 化学分析方法验证程序

检测设备

1. Thermo Fisher QuantStudio 5 qPCR仪：用于甲基化特异性PCR扩增

2. Agilent 2100 Bioanalyzer：核酸片段分析系统（分辨率0.1-50 ng/μL）

3. Beckman Coulter DTX880 Multimode Detector：荧光偏振法测酶活性

4. Waters ACQUITY UPLC H-Class系统：亚硫酸氢盐转化产物分离（0.1-5 ppm检出限）

5. Malvern MicroCal PEAQ-DSC：差示扫描量热仪（温度精度±0.1℃）

6. PerkinElmer LabChip GX Touch HT：高通量核酸分析（通量384样/小时）

7. Eppendorf BioSpectrometer kinetic：实时动力学监测（波长范围190-830 nm）

8. Roche LightCycler 480 II：高分辨率熔解曲线分析（温度梯度0.01℃/s）

9. Illumina NovaSeq 6000：全基因组甲基化测序（通量6 Tb/run）

10. Shimadzu LCMS-8060NX：超高效液相色谱-质谱联用系统（质量精度1 ppm）