1. 酶活性测定:反应体系含50 mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5),底物浓度0.5-5 mM异柠檬酸,25℃下监测340 nm处NADH消耗速率
2. 比活力计算:以单位时间内催化1 μmol底物转化所需的酶量定义(U/mg),误差范围≤±5%
3. pH稳定性测试:考察pH 6.0-9.0范围内酶活保留率(37℃孵育1 h)
4. 热稳定性分析:30-60℃梯度温育30 min后残余活性测定
5. 抑制剂效应评估:测试草酰乙酸(0.1-10 mM)、3-硝基丙酸(1-100 μM)的IC50值
1. 微生物样本:结核分枝杆菌、白色念珠菌等病原微生物培养物
2. 临床样本:肺泡灌洗液/痰液中病原微生物分泌酶检测
3. 工业酶制剂:重组表达型异柠檬酸裂合酶纯度验证
4. 植物组织:油料作物种子乙醛酸循环相关酶系分析
5. 食品添加剂:柠檬酸生产菌株代谢通路关键酶监测
ISO 21703:2019《生物技术-酶活性测定-异柠檬酸裂解酶分光光度法》
ASTM E2694-16《Standard Test Method for Measurement of Hydrolase Enzyme Activity》
GB/T 34799-2017《蛋白酶K活性检测方法》中比色法改良方案
GB 4789.43-2016《食品微生物学检验 病原菌毒力基因检测》相关技术规范
Pharmacopoeia Europa 10.0(2.6.12章)酶活性测定通则
1. Thermo Scientific Genesys 150 UV-Vis分光光度计:波长范围190-1100 nm,温控精度±0.1℃
2. Agilent 1260 Infinity II HPLC系统:配备DAD检测器,用于底物/产物定量分析
3. Eppendorf Mastercycler X50梯度PCR仪:温度均一性±0.1℃,支持快速升降温程序
4. Beckman Coulter Optima XPN-80超速离心机:最大转速80,000 rpm,温控范围-20℃至40℃
5. Malvern Zetasizer Nano ZS动态光散射仪:粒径测量范围0.3 nm-10 μm,用于酶聚集状态分析
6. Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra电泳系统:电压范围10-500 V,支持Native-PAGE活性染色
7. Mettler Toledo SevenExcellence pH计:分辨率0.001 pH,自动温度补偿功能
8. Memmert INCOmed培养箱:温度范围0-70℃,CO2浓度控制精度±0.1%
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。
以上是与异柠檬酸裂合酶相关的简单介绍,具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。