检测项目

1. 实时荧光定量RT-PCR检测：靶向病毒NP基因（引物序列：5'-ATGGCGATAAAGACAGCTAC-3'/5'-CTCCGTCAACAGGTGGAATC-3'），灵敏度≤10 copies/μL

2. 病毒抗原ELISA检测：使用重组GP蛋白包被板（货号MBV-GP-001），OD450临界值≥0.25判定阳性

3. 病毒分离培养：Vero E6细胞系培养（ATCC CRL-1586），CPE观察周期5-7天

4. 中和抗体效价测定：空斑减少中和试验（PRNT90），血清稀释梯度1:20至1:2560

5. 全基因组测序：Illumina NovaSeq 6000平台（PE150），覆盖度≥99.9%

检测范围

1. 临床样本：急性期患者全血（EDTA抗凝）、血清、咽拭子及尸检组织样本

2. 环境标本：疫区动物（非洲果蝠）脏器组织、排泄物及洞穴土壤样本

3. 生物制品：疫苗生产用细胞基质及病毒种子批检定

4. 防护装备：医用防护服表面病毒残留检测（采样面积10×10cm）

5. 实验耗材：细胞培养用培养基无菌性验证及支原体污染筛查

检测方法

1. WHO《埃博拉与马尔堡出血热实验室诊断指南》（2014版）推荐RT-PCR方案

2. ISO 15189:2012《医学实验室质量和能力要求》生物安全条款

3. GB/T 19438.1-2004《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》改良版

4. ASTM E2888-19《病毒中和试验标准实施规程》

5. GB 19489-2008《实验室生物安全通用要求》BSL-4条款

检测设备

1. Bio-Rad CFX96实时荧光定量PCR仪（模块温度精度±0.1℃）

2. Thermo Fisher Class III B2型生物安全柜（风速0.50±0.025m/s）

3. Eppendorf 5430R高速冷冻离心机（最大转速30,000rpm）

4. Miltenyi Biotec gentleMACS全自动核酸提取仪（通量24样本/批次）

5. Zeiss Axio Observer 7倒置荧光显微镜（40×物镜NA=0.95）

6. Sartorius CP225D电子天平（精度0.01mg）

7. Hamilton STARlet液体处理工作站（移液精度CV≤1%）

8. Memmert INCOmed细胞培养箱（CO₂控制精度±0.1%）

9. Illumina NovaSeq 6000测序系统（单次运行产出6Tb）

10. PerkinElmer EnVision多模式酶标仪（波长范围230-1000nm）