检测项目

1.酶活性测定：单位时间内催化底物生成产物的量（U/mg），反应体系pH7.40.2

2.比活力分析：每毫克蛋白中酶活性单位（U/mg），采用Lowry法测定总蛋白含量

3.底物特异性验证：针对UTP-GalNAc/GlcNAc的Km值测定（范围0.1-5.0mM）

4.热稳定性测试：37℃温育0-24小时保留活性≥80%

5.金属离子依赖性：Mg+浓度梯度（0-10mM）对催化效率的影响

检测范围

1.生物制药中间体：重组蛋白药物糖基化修饰水平评估

2.食品工业原料：乳制品中天然酶活性监测

3.临床诊断样本：肿瘤标志物O-GlcNAc糖基化异常分析

4.基因工程菌株：重组GalNAc-T表达菌的发酵液检测

5.体外诊断试剂：糖基转移酶试剂盒质量控制

检测方法

ISO20633:2018《生物技术-糖基转移酶活性测定通用指南》

GB/T35543-2017《糖蛋白N-乙酰氨基半乳糖转移酶活性测定法》

ASTME2694-16《体外酶活性测定的标准指南》

USP<1032>生物技术产品表征指南

EP2.6.20《糖基转移酶活性测定》

检测设备

1.Agilent1260InfinityIIHPLC：糖基化产物定量分析（色谱柱ZORBAXRRHD300SB-C18）

2.ThermoScientificMultiskanSkyHigh：微孔板吸光度测定（波长340nm/600nm）

3.MalvernZetasizerNanoZS：动态光散射法测定酶聚合状态

4.WatersXevoTQ-SmicroLC-MS/MS：糖链结构确证（质量范围m/z50-2000）

5.BeckmanCoulterAU480生化分析仪：自动化酶动力学曲线绘制

6.EppendorfMastercyclerX50s：PCR仪用于基因表达量验证

7.GEAKTApure25：蛋白纯化系统监测酶纯度（UV280/260nm）

8.PerkinElmerLambda365UV-Vis：比色法测定反应产物浓度