检测项目

1.荧光标记效率测定：采用荧光分光光度法检测标记率≥95%，激发波长/发射波长根据染料类型设定（如FAM495/520nm）

2.核酸纯度分析：OD260/OD280比值1.8-2.0，OD260/OD230比值≥2.0

3.标记密度验证：每1000碱基含1-4个标记位点（HPLC-MS联用测定）

4.热稳定性测试：95℃处理30分钟后保留率≥85%

5.定量准确性验证：标准曲线R值≥0.998（浓度范围0.1-100nM）

6.酶切耐受性测试：经EcoRI/HindIII双酶切后完整度≥90%

检测范围

1.质粒DNA：超螺旋结构载体（3-20kb），适用于基因编辑研究

2.病毒RNA：包膜病毒基因组（如SARS-CoV-2全长29.9kbRNA）

3.合成寡核苷酸：长度20-100bp的探针/引物序列

4.基因组DNA：哺乳动物提取样本（片段化至500-5000bp）

5.细胞RNA：总RNA样本（RIN值≥7.0）

6.甲基化DNA：经亚硫酸盐处理的修饰核酸样本

检测方法

ASTME2148-01:StandardTestMethodforDeterminationofFluorochromeLabelingEfficiency

ISO20395:2019Biotechnology-Requirementsforevaluatingtheperformanceofnucleicacidquantificationmethods

GB/T34797-2017核酸定量检测通用技术要求

GB/T37874-2019生物样品中核酸类物质检测规范

ISO/IEC17025:2017检测实验室通用能力要求

YY/T1256-2020体外诊断试剂用核酸纯化试剂盒技术要求

检测设备

ThermoFisherQuantStudio5Real-TimePCRSystem：支持TaqMan探针法的绝对定量分析

Agilent2100Bioanalyzer：执行DNA/RNA完整性及片段分布检测（芯片灵敏度0.5ng/μL）

NanoDropOneCMicrovolumeUV-VisSpectrophotometer：测量A260/A280纯度及浓度（检测范围2-27,500ng/μL）

BeckmanCoulterCytoFLEXSFlowCytometer：多色荧光标记效率分析（配置3激光13色检测通道）

WatersACQUITYUPLCH-ClassSystem：超高效液相色谱进行标记密度测定（BEHC18色谱柱）

AppliedBiosystems3500xLGeneticAnalyzer：毛细管电泳法验证片段长度（分辨率1bp）

MalvernZetasizerPro：动态光散射法测定核酸复合物粒径（测量范围0.3nm-10μm）

RocheLightCycler480II：执行熔解曲线分析验证探针特异性（温度分辨率0.1℃）