检测项目
1.RNA完整性检测：28S/18SrRNA比值≥2.0（Agilent2100生物分析仪）
2.病毒载量定量：实时荧光定量PCR扩增效率90-110%，R≥0.99
3.基因序列同源性：靶标区域（GenBank登录号NC_002015）匹配度≥98%
4.交叉反应验证：与马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）非特异性扩增ΔCt≥5
5.热稳定性测试：95℃处理10min后仍可检出≥10拷贝/μL
检测范围
1.菊花组培苗：茎尖分生组织与愈伤组织样本
2.扦插繁殖材料：包含母株枝条与生根插穗
3.进出口种苗：依据ISPMNo.31实施整批抽样检测
4.栽培基质：泥炭土、椰糠等介质中残留RNA片段
5.昆虫媒介：蚜虫（Macrosiphoniellasanborni）虫体带毒率测定
检测方法
1.ISO16140-3:2021《分子生物学方法验证规程》
2.GB/T35343-2017《植物类病毒检测技术规范》
3.ASTME3060-16《植物病原体实时PCR定量标准》
4.UPOVTG/241/1《菊花DUS测试病毒学判定标准》
5.SN/T2127-2015《进出境菊花检疫规程》
检测设备
1.QuantStudio7Pro实时荧光定量PCR仪：TaqMan探针法绝对定量
2.NanoDropOne超微量分光光度计：1μL样本核酸浓度测定
3.QIAcube全自动核酸纯化系统：配合RNeasyPlantMiniKit试剂盒
4.Bio-RadChemiDocMP成像系统：Northernblot杂交信号分析
5.EppendorfMastercyclerX50梯度PCR仪：退火温度优化范围35-65℃
6.Agilent4200TapeStation系统：RNA完整性数值（RIN）评估
7.LeicaCM1950冷冻切片机：茎尖组织超薄切片制备
8.MiltenyiBiotecGentleMACS解离器：木质化组织高效破碎
9.ThermoScientificHeratherm培养箱：37℃0.5℃恒温杂交
10.BeckmanCoulterBiomeki7自动化移液平台：96孔板高通量处理