检测项目

1.细菌分离培养：采用Bordet-Gengou培养基或Regan-Lowe培养基进行选择性培养，观察典型菌落形态与溶血特征

2.PCR核酸检测：靶向IS481插入序列（CT值≤35）、PT启动子基因（扩增效率≥90%）及FHA基因（灵敏度≤10拷贝/μL）

3.血清学ELISA检测：IgG/IgA抗体效价测定（临界值OD450≥0.3），抗原包被浓度5μg/mL

4.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）：特征峰m/z620050Da特异性鉴定

5.药敏试验：红霉素（MIC≤0.5μg/mL）、阿奇霉素（MIC≤0.12μg/mL）等抗生素敏感性测试

检测范围

1.临床样本：鼻咽拭子（采集量≥0.5mL转运液）、支气管肺泡灌洗液（细胞数≥10^4/mL）

2.疫苗产品：无细胞百日咳疫苗中PT抗原含量（≥20μg/mL）及纯度（SDS-PAGE纯度≥90%）

3.生物制品：细胞培养上清液中细菌内毒素水平（＜5EU/mL）

4.环境样本：医院ICU病房空气样本（采样量≥1000L）

5.实验动物：豚鼠攻毒模型肺组织匀浆液（菌落计数≥10^6CFU/g）

检测方法

ISO/TS15216-1:2017分子生物学方法验证规范

CLSIM45-A3需氧菌抗菌药物敏感性试验标准

GB/T14926.42-2018实验动物微生物学检验方法

WS271-2007百日咳诊断标准及处理原则

EP7-A3临床实验室质量控制指南

检测设备

1.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪（通量96孔/run）

2.BACTECFX40全自动血培养系统（检出限≤1CFU/mL）

3.BrukerMALDIBiotyper质谱系统（数据库版本MBTCompassv4.1）

4.BioTekSynergyH1多功能酶标仪（波长范围200-999nm）

5.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机（最大转速30,000rpm）

6.MemmertINCOmed培养箱（温度控制0.1℃）

7.SartoriusCP225D精密天平（精度0.01mg）

8.MiltenyiBiotecGentleMACS组织处理器（程序设置C管模式）

9.HamiltonMicrolabSTARlet液体工作站（移液精度CV≤2%）

10.OlympusBX53荧光显微镜（物镜100油镜NA1.4）