检测项目
1.代谢产物定量分析:葡萄糖、乳酸、氨基酸(谷氨酸/赖氨酸)、有机酸(柠檬酸/琥珀酸)、次级代谢产物(抗生素/色素)
2.酶活性测定:ATP酶(EC3.6.1.3)、NADH脱氢酶(EC1.6.5.3)、磷酸果糖激酶(EC2.7.1.11)、丙酮酸脱羧酶(EC4.1.1.1)、限速酶特异性活性
3.同位素示踪分析:13C标记底物通量分布、15N同位素丰度测定、代谢网络流量平衡计算
4.代谢组学全谱分析:LC-QTOF-MS检测500-2000Da小分子化合物、GC-MS挥发性代谢物鉴定
5.细胞生理参数:比生长速率(μmax)、得率系数(Yx/s)、ATP周转率(mmol/gDCW/h)
检测范围
1.工业微生物:大肠杆菌(E.coli)、酿酒酵母(S.cerevisiae)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)工程菌株
2.基因工程菌:CRISPR编辑菌株、合成生物学元件库构建体
3.动植物细胞培养液:CHO细胞培养基、昆虫细胞Sf9培养体系
4.生物反应器样本:5L-2000L发酵罐取样的胞内/外代谢物
5.合成生物学产物:非天然氨基酸、聚羟基脂肪酸酯(PHA)、萜类化合物
检测方法
ASTME3134-17《微生物代谢表型分析方法》
ISO17025:2017《代谢组学数据质量规范》
GB/T35809-2018《工业微生物菌种代谢特性测试通则》
GB/T38579-2020《生物样品中氨基酸的测定液相色谱-质谱联用法》
ISO20638:2015《婴儿配方乳粉中肌醇测定同位素稀释质谱法》
检测设备
Agilent1260InfinityIIHPLC系统:配备DAD检测器(190-950nm),用于氨基酸和有机酸定量
ThermoQExactiveHF-X质谱仪:分辨率240,000@m/z200,用于精确质量数测定
WatersACQUITYUPLCH-Class系统:BEHC18色谱柱(1.7μm,2.1100mm),极性化合物分离
ShimadzuGC-2030气相色谱仪:DB-WAX毛细管柱(30m0.25mm),挥发性代谢物分析
Cytation5细胞成像微孔板检测系统:整合荧光强度与细胞密度实时监测
SartoriusCedexBioHT分析仪:同时测定pH、DO、活细胞密度等12项参数
ABIQuantStudio7Pro实时PCR仪:SYBRGreen法测定关键基因表达量
BeckmanCoulterCytoFLEX流式细胞仪:488nm/640nm双激光器配置,单细胞代谢活性分选