检测项目
1.病毒外壳蛋白（CP）抗原效价检测：采用ELISA法测定效价≥1:1000为阳性阈值
2.RNA基因组全长测序：覆盖NCBI数据库OYDV参考序列（登录号NC_029017.1）≥95%
3.实时荧光定量PCR（qPCR）：Ct值≤35判定为阳性反应
4.电镜形态学观察：病毒粒子长度700-750nm12-15nm
5.寄主接种试验：接种后14天内出现典型黄化症状
检测范围
1.洋葱种子：包括常规种质与商业化杂交种
2.鳞茎组织：重点检测生长点及维管束区域
3.叶片样本：采集发病初期黄化叶片中部区域
4.其他葱属植物：大蒜、韭菜、大葱等近缘物种
5.土壤及栽培介质：基质中病毒RNA残留量≥10^3copies/g
检测方法
ISO16140-3:2021《分子生物学方法验证规范》qPCR验证流程
GB/T36834-2018《植物病毒ELISA检测技术规程》双抗体夹心法
ASTME3060-16《植物病原体实时PCR定量标准指南》
GB/T3543.5-1995《农作物种子检验规程》健康度测定
JISK3850-3:2020《空气中微生物测定》气溶胶采样法
检测设备
ThermoScientificMultiskanFC酶标仪：波长范围400-700nm，支持96孔板ELISA读数
ABI7500实时荧光定量PCR仪：TaqMan探针法检测灵敏度达10copies/μL
HitachiHT7800透射电镜：加速电压40-120kV，配备CCD相机捕获病毒粒子图像
IlluminaNovaSeq6000测序平台：PE150模式完成全基因组测序
EppendorfCentrifuge5430R冷冻离心机：最大转速30,000rpm用于核酸提取
Bio-RadChemiDocMP成像系统：化学发光法Westernblot分析CP蛋白
SartoriusQuintix精密天平：称量精度0.01mg用于试剂配制
ESCOAirstream二级生物安全柜：提供ISOClass5洁净操作环境
MemmertIPP110培养箱：温度控制精度0.3℃用于寄主接种培养