检测项目

1.MGMT酶活性定量：采用放射性同位素标记法（3H-甲基化底物），灵敏度0.1U/mg蛋白

2.启动子甲基化状态分析：焦磷酸测序法测定CpG岛甲基化率（分辨率1%）

3.蛋白表达水平检测：WesternBlot定量（ECL化学发光系统），线性范围0.05-5ng/μL

4.mRNA表达量测定：实时荧光定量PCR（TaqMan探针），Ct值重复性CV≤2%

5.热稳定性测试：37℃孵育0-120分钟（时间梯度0.5℃温控）

检测范围

1.肿瘤组织样本：胶质瘤、结直肠癌等新鲜/石蜡包埋组织（厚度4-5μm）

2.外周血单核细胞：EDTA抗凝全血（采集后8小时内处理）

3.细胞培养物：原代细胞系及肿瘤细胞株（传代次数≤15）

4.脑脊液样本：离心后上清液（存储温度-80℃）

5.基因工程菌株：大肠杆菌BL21(DE3)重组表达系统

检测方法

1.ISO15189:2012《医学实验室质量和能力要求》第5.5条款

2.GB/T30934-2014《甲基化特异性PCR检测方法》

3.ASTME3066-16《焦磷酸测序法DNA甲基化分析标准指南》

4.CLSIEP17-A2《检出限与定量限评估协议》

5.ICHQ2(R1)《分析方法验证技术要求》

检测设备

1.Agilent1260InfinityII高效液相色谱仪（色谱柱ZORBAXSB-C18）

2.ThermoFisherQuantStudio7Pro实时荧光定量PCR仪（96孔模块）

3.Bio-RadChemiDocMP成像系统（20MP科学级CCD）

4.EppendorfCentrifuge5430R（最大转速30,000g）

5.BeckmanCoulterDTX880微孔板读板机（波长范围220-850nm）

6.LeicaCM1950冰冻切片机（切片精度1μm）

7.PerkinElmerTri-Carb4910TR液闪计数器（双光电倍增管设计）

8.QiagenQIAcube全自动核酸纯化系统（通量12样本/批次）

9.HitachiF-7100荧光分光光度计（150W氙灯光源）

10.MemmertINCOmed细胞培养箱（CO₂控制精度0.1%）