检测项目

1.AHSV抗原ELISA检测：采用VP7蛋白单克隆抗体，灵敏度≥95%

2.病毒分离培养：使用C6/36细胞系进行病毒增殖培养

3.RT-qPCR核酸检测：靶向VP2基因片段（引物序列：F:5'-CTGAACGTGACCTGGAT-3'）

4.中和抗体效价测定：基于Vero细胞的中和试验（NT≥1:32判阳性）

5.全基因组测序分析：Illumina平台完成10节段RNA测序（覆盖度≥99.9%）

检测范围

1.马属动物血清样本（采集量≥5ml）

2.全血样本（EDTA抗凝管保存）

3.脾脏/肺脏组织匀浆液（处理浓度10%w/v）

4.精液/胚胎等遗传物质（冷冻保存样本）

5.进出口检疫中媒介昆虫（库蠓属标本）

检测方法

1.OIETerrestrialManual2023Chapter3.1.1标准流程

2.GB/T22915-2008非洲马瘟诊断技术规范

3.ISO/IEC17025:2017实验室管理体系要求

4.SN/T1313-2019非洲马瘟检疫技术规范

5.ASTME2888-19实时荧光PCR标准实施规程

检测设备

1.ThermoFisherQuantStudio7Pro实时荧光定量PCR仪（支持TaqMan探针法）

2.EppendorfCentrifuge5910R高速冷冻离心机（最大转速21,130g）

3.BioTekSynergyH1多功能酶标仪（支持450nm/630nm双波长检测）

4.ThermoScientificHeracell150iCO₂培养箱（温度控制0.1℃）

5.IlluminaNovaSeq6000测序系统（通量20Breads/run）

6.LeicaDMi8倒置荧光显微镜（配备10/40物镜）

7.SartoriusCubisMSA225S分析天平（精度0.01mg）

8.MiltenyiBiotecGentleMACS组织匀浆器（预设程序C_01）

9.HamiltonSTARlet液体处理工作站（移液精度1%）

10.PanasonicMCO-170AIC恒温培养箱（温度范围5-50℃）