检测项目

1.核酸序列分析：靶向ORF1ab/N/E基因区域，引物序列设计覆盖100-500bp片段

2.抗原抗体结合效价测定：采用ELISA法检测IgG/IgM效价≥1:320

3.病毒载量定量：qPCR扩增效率90-110%，Ct值≤35判定阳性

4.宿主细胞感染实验：TCID50法测定半数感染剂量≥10^3PFU/mL

5.基因分型鉴定：全基因组测序覆盖度≥99%，SNP检出限0.1%

检测范围

1.临床样本：咽拭子/肺泡灌洗液/血清/组织切片（厚度4μm）

2.环境样本：污水/气溶胶/物体表面拭子（采集面积10cm）

3.生物制品：疫苗原液/血液制品/细胞培养基（体积≥1mL）

4.实验动物：SPF级小鼠肺组织/恒河猴血清（保存温度-80℃）

5.食品样本：冷链肉类/水产品表面涂抹样（取样量25g）

检测方法

ISO15216-1:2017食品链病毒核酸检测规范

ASTME2888-19环境表面病毒采样标准

GB/T37847-2019高通量测序技术指南

WS/T683-2020呼吸道病毒核酸检测标准

ISO/IEC17025:2017实验室质量体系要求

检测设备

ThermoFisherQuantStudio5：实时荧光定量PCR仪，支持96孔板快速扩增

IlluminaMiSeq：高通量测序平台，单次输出15Gb数据量

BioTekSynergyH1：多功能酶标仪，具备450nm/630nm双波长检测

SartoriusIncuSafeS90：三级生物安全型CO2培养箱

BeckmanCoulterCytoFLEXS：流式细胞仪，配置488nm/640nm双激光器

ZeissAxioObserver7：倒置荧光显微镜，配备10-100油镜系统

MiltenyiBiotecGentleMACS：组织匀浆处理器，转速范围50-500rpm

EppendorfCentrifuge5430R：高速冷冻离心机，最大转速15,000rpm