检测项目
1.大肠杆菌O157:H7分离培养：采用CT-SMAC培养基筛选，菌落特征为无色透明（山梨醇不发酵）
2.志贺毒素（Stx1/Stx2）基因检测：多重PCR扩增目标序列（stx1:210bp,stx2:484bp）
3.溶血素活性测定：绵羊血琼脂平板观察β-溶血环（直径≥2mm）
4.血清凝集试验：O157抗血清特异性凝集（效价≥1:160）
5.肠黏膜损伤评估：HE染色观察隐窝结构破坏及中性粒细胞浸润程度（分级≥III级）
检测范围
1.临床样本：患者粪便标本（采集后2小时内送检）
2.食品样本：生鲜牛肉制品（表面取样≥25g）、生乳（离心沉淀物）
3.环境样本：屠宰场器械表面拭子（接触面≥100cm）
4.动物源性材料：反刍动物直肠拭子（保存于Cary-Blair培养基）
5.水样标本：市政供水系统过滤浓缩液（孔径0.45μm滤膜）
检测方法
1.ISO16654:2001《食品和动物饲料中大肠杆菌O157的检测》
2.GB4789.36-2016《食品安全国家标准大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》
3.ASTMF3170-21《产志贺毒素大肠杆菌分子检测标准指南》
4.WS271-2007《感染性腹泻诊断标准》附录C病理学判定规范
5.SN/T2524-2010《进出口食品中致泻性大肠杆菌检测》实时荧光PCR法
检测设备
1.ABI7500实时荧光定量PCR仪：TaqMan探针法毒素基因定量（灵敏度10CFU/mL）
2.Bio-RadChemiDocMP成像系统：Westernblotting毒素蛋白验证（分辨率3.5μm）
3.ThermoScientificHeratherm微生物培养箱：O157:H7选择性培养（控温精度0.2℃）
4.OlympusBX53荧光显微镜：免疫荧光染色观察（物镜NA≥0.75）
5.BDFACSCantoII流式细胞仪：细菌表面抗原定量分析（检测限50events/μL）
6.Sartorius微生物限度检测系统：样品前处理过滤装置（孔径分级0.22-5μm）
7.EppendorfCentrifuge5430R：粪便样本离心分离（最大RCF30,130g）
8.BiomerieuxVITEK2Compact：细菌生化鉴定系统（数据库含428种特征谱）
9.MilestoneUltraWAVE微波消解仪：食品基质预处理（控温范围50-300℃）
10.LeicaRM2235切片机：肠组织病理制片（切片厚度3-5μm）