检测项目

1.酶活性测定：单位时间内NADH氧化速率（U/mg蛋白），测定波长340nm

2.比活力计算：基于Bradford法测定总蛋白浓度（mg/mL），计算比活力（U/mg）

3.最适pH范围：采用Tris-HCl缓冲体系（pH6.0-8.5），间隔0.5单位梯度测试

4.温度稳定性：30-50℃恒温处理30min后残余活性测定（%）

5.米氏常数（Km）测定：底物3-磷酸甘油酸浓度梯度0.1-5.0mM下的动力学分析

检测范围

1.重组表达体系：大肠杆菌/酵母表达的重组PGAM蛋白制剂

2.临床样本：肿瘤组织匀浆液中的PGAM同工酶分型

3.诊断试剂盒：PGAM活性检测试剂盒的质控验证

4.食品工业用酶：微生物发酵生产的PGAM粗酶制剂

5.药物研发：PGAM抑制剂筛选实验中的酶源样品

检测方法

ISO15193:2009《体外诊断医疗器械-生物源性样品中量的测量-参考测量程序的表述》

GB/T37861-2019《生物样品中酶活性测定通用方法》

ASTME2935-17《StandardGuideforEnzymeActivityAssays》

CLSIEP05-A3《EvaluationofPrecisionofQuantitativeMeasurementProcedures》

JPXVIIGeneralTests2.63《EnzymeImmunoassayMethods》

检测设备

ThermoScientificGenesys150UV-Vis分光光度计：波长精度0.5nm，带宽1nm

Agilent1260InfinityIIHPLC系统：配备ZORBAXSB-C18色谱柱（4.6150mm,5μm）

EppendorfMastercyclerX50PCR仪：温度精度0.1℃，支持梯度PCR程序

BeckmanCoulterOptimaXPN-100超速离心机：最大转速100,000rpm，温控范围0-40℃

SartoriusCubisMSA225S分析天平：称量精度0.01mg/0.001mg双量程模式

Bio-RadModel680MicroplateReader：支持动力学模式读取（间隔10s）

MettlerToledoSevenExcellencepH计：分辨率0.001pH，自动温度补偿功能

MemmertINCOmed恒温培养箱：温度均匀性0.3℃，湿度控制范围10-90%RH

MalvernZetasizerNanoZSP动态光散射仪：粒径测量范围0.3nm-10μm

CytivaKTApure蛋白纯化系统：在线UV280/电导率/pH多参数监测模块