检测项目

1.血清IgM抗体检测：采用捕获法ELISA技术，灵敏度≥95%，特异性≥98%，临界值OD450nm=0.250.05

2.血清IgG抗体定量：间接ELISA法测定效价梯度（1:10-1:1280），动态范围0.1-5.0IU/mL

3.脑脊液病毒RNA检测：实时荧光RT-PCR法靶向NS5基因片段（扩增效率90-110%，Ct值≤38）

4.中和抗体效价测定：微量细胞病变抑制法（CPE法），测试梯度1:2至1:1024稀释

5.病毒分离培养：C6/36细胞系接种观察CPE效应，培养周期7-14天

检测范围

1.临床样本：急性期/恢复期双份血清（采集间隔≥14天）、脑脊液（发病7日内采集）

2.疫苗制品：Vero细胞培养灭活疫苗原液（病毒滴度≥6.5lgPFU/mL）

3.实验动物模型：BALB/c小鼠脑组织悬液（感染后3-5天取样）

4.媒介生物：三带喙库蚊成蚊研磨液（捕获后24小时内处理）

5.细胞培养物：感染72小时的BHK-21细胞上清液（TCID50≥10^4/mL）

检测方法

ISO15189:2022《医学实验室质量和能力要求》血清学检测规范

GB/T37870-2019《核酸检测试剂盒质量评价技术规范》RT-PCR扩增标准

WS/T571-2017《流行性乙型脑炎诊断标准》病例确诊指南

ASTME2888-19《病毒中和试验标准操作规程》CPE法执行细则

YY/T1596-2017《人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒》ELISA质控参照

检测设备

1.ABI7500实时荧光定量PCR仪：支持TaqMan探针法核酸检测（温度精度0.1℃）

2.BioTekSynergyH1酶标仪：4光路系统支持450/630nm双波长ELISA读数

3.ThermoCO₂培养箱（型号371）：三气控制（误差0.2%），C6/36细胞培养专用

4.EppendorfCentrifuge5430R：最大RCF30,130g，适配1.5mL病毒RNA提取管

5.LeicaDMi8倒置显微镜：10-40相衬观察细胞病变效应（CPE）

6.MiltenyiBiotecGentleMACS组织匀浆器：程序化处理蚊媒样本（转速2000rpm）

7.BeckmanOptimaXPN-100超速离心机：100,000g病毒颗粒富集（k因子≤200）

8.SartoriusCubisII分析天平：称量精度0.01mg（符合GLP规范）

9.EscoAirstream二级生物安全柜：ISOClass5环境维持（风速0.45m/s20%）

10.PanasonicMCO-20AIC恒温箱：37℃0.3℃维持血清样本稳定性