检测项目
1.血清IgM/IgG抗体检测:采用ELISA法测定抗体效价(灵敏度≥95%,特异性≥98%)
2.病毒RNA定量分析:RT-qPCR法检测阈值循环数(Ct值≤38为阳性)
3.中和抗体滴度测定:空斑减少中和试验(PRNT50≥1:10判定阳性)
4.脑脊液蛋白浓度测定:比浊法测定总蛋白(参考区间150-450mg/L)
5.病毒分离培养:VeroE6细胞系培养(CT值≤35时进行分离)
检测范围
1.蜱虫样本:全蜱研磨液(需包含唾液腺组织)
2.人体血清:急性期与恢复期双份血清(采集间隔≥14天)
3.脑脊液标本:发病7日内采集的无菌样本
4.环境样本:疫区植被表面拭子(采集面积1010cm)
5.动物宿主标本:啮齿类动物肝脾组织匀浆液
检测方法
1.ISO15189:2012《医学实验室质量和能力要求》血清学检测规范
2.GB/T40982-2021《病毒性脑炎诊断技术规范》核酸检测标准
3.ASTME2888-19《蜱传病原体分子检测标准指南》
4.WS/T571-2017《流行性乙型脑炎诊断标准》抗体效价判定规则
5.ISO/IEC17025:2017《检测和校准实验室能力通用要求》质控体系
检测设备
1.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪(病毒RNA定量)
2.BioTekSynergyH1多功能酶标仪(ELISA法抗体测定)
3.Eppendorf5430R高速冷冻离心机(样本前处理)
4.MiltenyiBiotecGentleMACS组织研磨器(蜱虫匀浆制备)
5.IlluminaMiSeq测序平台(病毒全基因组分析)
6.OlympusBX53荧光显微镜(免疫组化观察)
7.SartoriusCubisII精密天平(试剂称量)
8.MemmertINCOmed细胞培养箱(病毒分离培养)
9.BeckmanCoulterAU5800生化分析仪(脑脊液蛋白测定)
10.ThermoScientificHeracellVIOS生物安全柜(样本处理防护)