检测项目

1.病毒外壳蛋白（CP）含量测定：采用ELISA法检测，灵敏度≥0.1ng/μL，线性范围0.1-10ng/μL

2.RNA基因组浓度分析：分光光度法测定OD260/280比值（1.8-2.0），纯度要求RIN≥7.0

3.血清学反应效价测试：免疫胶体金试纸条法，最低检出限为10^3病毒粒子/mL

4.病理学特征观察：显微镜检叶鞘维管束褐变程度分级（0-IV级）

5.分子生物学鉴定：RT-PCR扩增S7-S10基因片段（目标长度876bp），退火温度581℃

检测范围

1.水稻种子及幼苗样本：包括籼稻、粳稻及杂交稻品种

2.田间采集叶片样本：需包含叶脉完整组织段（长度≥5cm）

3.土壤基质样本：耕作层（0-20cm）土壤悬浮液离心上清

4.灌溉水样：过滤浓缩后体积≥500mL

5.昆虫媒介样本：黑尾叶蝉（Nephotettixcincticeps）成虫消化道提取物

检测方法

ISO16140-6:2019《分子生物学方法验证规范》规定RT-qPCR扩增效率需达90-110%

GB/T28067-2011《植物病毒血清学检测通则》要求阳性对照OD值≥2.0

SN/T2124-2008《进出境水稻检疫规程》明确电镜观察需达到20000放大倍率

OIE陆生动物诊断手册第3.09章规定ELISA板重复孔CV值≤15%

GB/T3543.5-1995《农作物种子检验规程》要求发芽率测试与病毒携带率同步测定

检测设备

ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪：支持TaqMan探针法绝对定量分析

Agilent2100Bioanalyzer生物分析仪：用于RNA完整性指数（RIN）精确测定

Bio-RadModel680酶标仪：配备570/630nm双波长滤光片系统

HitachiHT7800透射电镜：配备CCD相机实现病毒粒子形态学捕捉

EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机：最大转速15,000rpm（转子FA-45-30-11）

LeicaDM3000LED正置显微镜：配置DFC450C摄像头进行病理切片成像

MilestoneETHOSX微波消解仪：用于土壤样本前处理程序优化

SartoriusCubisII超微量天平：称量精度达0.1μg（量程2.1g）

MemmertICP800培养箱：温度控制精度0.3℃（20-60℃范围）

BeckmanCoulterCytoFLEX流式细胞仪：配备488nm激光器进行单粒子计数分析