检测项目
1.启动子活性检测:测量荧光素酶报告基因发光强度(RLU),灵敏度≥10^4RLU/μg蛋白
2.转录因子结合效率:采用EMSA法测定DNA-蛋白结合常数(Kd值),分辨率达0.1nM
3.miRNA靶向验证:双荧光素酶系统测定海肾/萤火虫荧光比值变化(阈值30%)
4.信号通路响应值:NF-κB/AP-1等通路报告系统检测IC50值(浓度梯度0.1-100μM)
5.蛋白核转位效率:EGFP融合蛋白亚细胞定位分析(共聚焦显微镜200成像)
检测范围
1.哺乳动物细胞系:HEK293T、HeLa、HepG2等转染后裂解液
2.原代培养细胞:外周血单核细胞(PBMC)及干细胞三维培养体系
3.转基因植物材料:拟南芥T3代纯合株系叶片组织
4.重组质粒载体:含SV40/CMV启动子的pGL3-basic系列报告载体
5.临床病理样本:福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织切片
检测方法
1.双荧光素酶报告系统:符合ISO20186-3:2022标准,参照PromegaE1910方案
2.凝胶迁移实验(EMSA):执行GB/T37876-2019技术规范
3.实时细胞成像:依据ASTME3076-17动态监测标准
4.流式细胞分选:采用GB/T39730-2020细胞分选技术规程
5.WesternBlot验证:参照ISO/TS20922:2018转膜效率控制标准
检测设备
1.GloMaxDiscover多功能检测仪(PromegaGM3000):同步测量荧光素酶/β-gal活性值
2.SpectraMaxi3x微孔板读板机(MolecularDevices):支持384孔板化学发光检测
3.LSM900激光共聚焦显微镜(Zeiss):配备Airyscan2超分辨模块
4.QuantStudio™7Pro实时定量PCR仪(ThermoFisher):96孔Fast模式运行
5.Bio-RadChemiDoc™MP成像系统:化学发光曝光时间0.1-600秒可调
6.Agilent2100生物分析仪:RNA完整性指数(RIN)测定精度0.1
7.NanoDrop™One超微量分光光度计(ThermoScientific):核酸浓度检测范围2-27,500ng/μL
8.BeckmanCoulterCytoFLEX流式细胞仪:配置405/488/638nm三激光系统
9.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机:最大转速30,000g
10.ThermoScientificHeracell™VIOS培养箱:CO₂控制精度0.1%