检测项目

1.病毒外壳蛋白（CP）ELISA检测：采用双抗体夹心法测定CP浓度阈值≥0.15μg/mL

2.核酸RT-qPCR定量：靶标基因为CP基因片段（GenBank登录号NC_003621），Ct值≤35判定阳性

3.病毒粒子电镜观察：负染法检测直径28-30nm的线状病毒颗粒

4.寄主植物接种试验：心叶烟（Nicotianaglutinosa）系统侵染率≥80%

5.血清学特异性验证：与CMV、TSWV等近缘病毒交叉反应率≤5%

检测范围

1.花生种子（ArachishypogaeaL.）种皮及胚组织

2.田间植株叶片/茎秆组织（采样期：现蕾期至成熟期）

3.土壤残留物（耕作层0-20cm深度样本）

4.蚜虫媒介（AphiscraccivoraKoch）虫体提取物

5.加工制品（带壳花生仁、冷榨花生油未精炼前样品）

检测方法

ISO16140-3:2021《分子生物学方法验证规程》病毒核酸检测流程

GB/T36809-2018《植物病毒ELISA检测技术规范》双抗体夹心法

ASTME1758-95(2021)《植物病原体实时荧光定量PCR标准指南》

SN/T2123-2008《进出境花生种传病毒检疫规程》生物测定法

OEPP/EPPOPM7/113(1)《花生斑驳病毒诊断标准》电镜观察规范

检测设备

ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪：TaqMan探针法核酸扩增

BioTekELx808全自动酶标仪：450nm波长OD值读取精度0.002

HitachiHT7800透射电子显微镜：120kV加速电压下10万倍成像分辨率

EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机：最大转速30,000rpm的RNA提取

Agilent4200TapeStation生物分析仪：RNA完整性指数（RIN）≥7.0判定合格

LeicaCM1950冷冻切片机：植物组织样本-20℃恒温切片厚度10μm

MemmertIPP110培养箱：281℃条件下寄主植物接种培养

Milli-QIQ7000超纯水系统：制备电阻率18.2MΩcm的分子级实验用水