检测项目

1.TSP-1浓度测定：采用ELISA法测量血浆/血清样本中TSP-1含量（单位μg/mL）

2.构象活性分析：通过圆二色谱法测定α螺旋与β折叠比例（波长范围190-260nm）

3.钙离子结合能力：原子吸收光谱法测定Ca⁺结合量（检出限0.1ppm）

4.血小板反应蛋白重复序列（TSR）定量：WesternBlot法分析TSR结构域表达量

5.血管生成抑制活性：内皮细胞迁移实验（Transwell系统）评估抑制率（误差5%）

检测范围

1.临床样本：EDTA抗凝血浆（采集后2h内处理）、血清样本（离心3000g15min）

2.细胞培养液：内皮细胞/血小板条件培养基（需添加蛋白酶抑制剂）

3.生物材料涂层：血管支架表面修饰TSP的覆盖率（SEM-EDS联用验证）

4.重组蛋白制品：大肠杆菌/CHO细胞表达TSP纯度（SEC-HPLC≥95%）

5.冻干制剂：TSP冻干粉复溶活性测试（溶解时间≤3min）

检测方法

1.ISO15197:2013《体外诊断系统-定量测量程序的验证要求》

2.ASTME2520-21《重组蛋白纯度测定标准指南》

3.GB/T37864-2019《生物样品中蛋白质定量核磁共振法》

4.GB/T40154-2021《生物材料表面蛋白质吸附测试方法》

5.CLSIEP17-A2《临床实验室检测限建立与验证指南》

检测设备

1.Agilent1260InfinityIIHPLC系统：配备ZORBAXSB-C18色谱柱（4.6150mm），用于TSP分离纯化

2.ThermoScientificMultiskanSkyHigh酶标仪：波长范围340-850nm，支持96/384孔板ELISA读数

3.MalvernZetasizerPro动态光散射仪：测量TSP聚合体粒径分布（0.3nm-10μm）

4.BrukerTensorII傅里叶红外光谱仪：ATR模式分析TSP二级结构（分辨率4cm⁻）

5.HitachiSU8010场发射电镜：搭配EDS进行纳米级表面形貌观察及元素分析

6.WatersXevoTQ-S质谱仪：ESI源测定TSP分子量（精度0.01%）

7.PerkinElmerLambda365紫外分光光度计：测定280nm处吸光度计算蛋白浓度

8.BeckmanCoulterCytoFLEX流式细胞仪：检测TSP-CD36结合活性（荧光标记法）