检测项目
1.酶活性测定:单位时间内催化谷胱甘肽合成的速率(U/mg蛋白)
2.蛋白质浓度测定:通过BCA法测定样本总蛋白含量(μg/mL)
3.比活性计算:酶活性与蛋白浓度的比值(U/mg)
4.热稳定性测试:在40℃/60℃下处理30分钟后保留活性百分比(%)
5.抑制剂敏感性分析:半抑制浓度IC50值测定(μmol/L)
6.分子量验证:SDS-PAGE电泳法测定亚基分子量(kDa)
检测范围
1.生物制药原料:重组谷胱甘肽合成酶冻干粉
2.临床样本:人血清/血浆/红细胞裂解液
3.食品添加剂:含谷胱甘肽的功能性食品原料
4.细胞培养物:哺乳动物细胞/大肠杆菌表达体系
5.工业酶制剂:固定化酶载体材料
6.科研试剂:标准品/质控品/校准品
检测方法
1.ISO15193:2009《体外诊断医疗器械-生物源性样品中量的测量-酶催化浓度测量参考方法的表述》
2.GB/T33419-2016《生化试剂中蛋白酶K活性检测方法》改良法
3.ASTME2694-16《StandardTestMethodforMeasurementofAdenosineTriphosphateinWater-MiscibleMetalworkingFluids》适配法
4.JISK0400-66-10:1998《水质-谷胱甘肽的测定-酶法》
5.GB5009.257-2016《食品中谷胱甘肽的测定》第二法酶联免疫法
检测设备
1.Agilent1260InfinityII高效液相色谱仪:用于GSH/GSSG比值分析
2.ThermoScientificMultiskanSky全波长酶标仪:完成96孔板动力学测定
3.BeckmanCoulterAU5800全自动生化分析仪:实现批量样本自动化检测
4.MalvernZetasizerNanoZSP动态光散射仪:分析酶分子聚集状态
5.EppendorfBioSpectrometerbasic紫外分光光度计:进行340nm处NADPH吸光度监测
6.Bio-RadMini-PROTEANTetra电泳系统:执行SDS-PAGE纯度验证
7.MemmertINB500恒温培养箱:完成长时间温控反应
8.MettlerToledoXPR205DR微量天平:精确称量至0.01mg级
9.SartoriusPB-10pH计:反应体系pH值精确校准
10.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机:实现4℃低温样本处理