检测项目
1.探针特异性验证:靶标序列匹配度≥98%,非靶标结合率≤5%
2.灵敏度测试:最低检出限0.1pgDNA/μL
3.杂交效率评估:Tm值偏差1.5℃,信号强度CV≤8%
4.热稳定性分析:60℃加速老化72小时活性保留≥90%
5.重复性验证:批内RSD≤3%,批间RSD≤6%
检测范围
1.临床样本:外周血单核细胞/石蜡包埋组织切片
2.转基因作物:Bt蛋白基因Cry1Ab/Cry2Ae
3.微生物菌株:16SrRNA保守区V3-V4段
4.环境样本:水体中大肠杆菌O157:H7特异性基因
5.法医物证:人类STR基因座D18S51/D5S818
检测方法
ISO24276:2017《分子生物分析-核酸杂交技术要求》
GB/T19495.4-2018《转基因产品检测核酸定量PCR方法》
ASTME2186-02a(2020)《微阵列基因表达数据标准化规范》
ISO20395:2018《生物技术-核酸定量测量要求》
GB/T30989-2014《高通量基因测序技术规范》
检测设备
1.ABI7500荧光定量PCR仪:TaqMan探针法绝对定量
2.AgilentG2565CA基因芯片扫描仪:10μm分辨率扫描
3.ThermoMax400杂交炉:温控精度0.2℃
4.Bio-RadPowerPacBasic电泳系统:300V恒压输出
5.NanoDropOneC紫外分光光度计:1μL微量检测
6.IlluminaMiSeq测序仪:2300bp双端读长
7.RocheLightCycler480II:多重PCR扩增模块
8.EppendorfMastercycler梯度PCR仪:0.1℃温阶调节
9.BeckmanCoulterBiomeki7移液工作站:0.5μL精度
10.LeicaDMi8荧光显微镜:488nm/568nm双激发通道