检测项目

1.细菌分离培养：需记录菌落形态（直径0.3-0.5mm）、溶血特性（β型溶血）、NAD依赖性生长等参数

2.PCR核酸检测：设定16SrRNA基因扩增条件（退火温度58℃1℃，循环数35），Ct值判定阈值≤30

3.血清型分型：采用HI试验（血凝抑制效价≥1:16为阳性），覆盖A、B、C三个标准血清型

4.药敏试验：测试β-内酰胺类（MIC范围0.12-8μg/mL）、四环素类（MIC值≤2μg/mL）等12类抗生素

5.毒力基因检测：包括hmqA基因（扩增产物302bp）、tonB基因（退火温度62℃）等5个靶标

检测范围

1.种鸡精液样本（采集后4小时内送检）

2.禽类鼻窦拭子（含运输培养基的专用采样管）

3.病变组织样本（气管/肺脏组织冻存于-80℃）

4.禽类疫苗产品（灭活苗需检测残余DNA含量≤10ng/剂）

5.养殖场环境样本（空气滤膜采集量≥500L/份）

检测方法

ISO10272-2:2017《动物源性食品微生物学-副鸡嗜血杆菌计数》

GB/T14926.42-2020《实验动物微生物学检测方法》第42部分

OIE陆生动物诊断手册2023版第3.3.12章标准流程

ASTMF3170-22《禽类病原体分子检测通用要求》

NY/T563-2021《禽传染性鼻炎诊断技术》血清学方法

检测设备

ThermoFisherQuantStudio5实时荧光PCR仪（支持高分辨率熔解曲线分析）

BDBACTECFX40全自动血培养系统（配置专用PPLO培养基）

SiemensVITEK2Compact微生物鉴定系统（含NH卡条）

BioTekSynergyH1多功能酶标仪（支持HI试验自动判读）

Eppendorf5430R高速冷冻离心机（最大转速30,000rpm）

MemmertINCOmed培养箱（温度波动0.3℃，CO₂浓度可调）

MilliporeMilli-QIQ7000超纯水系统（电阻率18.2MΩcm）

LeicaDM500生物显微镜（配置100油镜及暗视野模块）

SartoriusCubisII分析天平（称量精度0.01mg）

HaierDW-86L626超低温冰箱（温度均匀性3℃）