检测项目

1.病原菌分离培养:采用PDA培养基(pH5.6-6.2),251℃暗培养7-14天

2.菌丝形态观察:测量菌丝直径(3.5-5.2μm)、隔膜间距(45-120μm)及分枝角度(60-90)

3.分生孢子检测:统计孢子密度(≥10^4CFU/g),测量孢子尺寸(12-184-6μm)

4.致病力测定:接种后观察病斑扩展速率(≥2.3mm/d),统计发病率(≥85%)

5.土壤带菌量分析:qPCR定量检测靶标基因(EF1-α)拷贝数(≥10^3copies/g)

检测范围

1.柿树根系样本(直径≤5mm的细根)

2.发病叶片样本(黄化或萎蔫症状区域)

3.根际土壤样本(深度20-40cm土层)

4.嫁接材料样本(砧木切口部位)

5.果实样本(早期褐变组织)

检测方法

1.ISO21427:2018《植物病原真菌分离培养技术规范》

2.GB/T3543.5-1995《农作物种子检验规程真菌病害检验》

3.ASTMD7990-15《植物病原体分子检测标准指南》

4.GB/T36852-2018《林木病害分子检测技术规程》

5.ISO16198:2015《土壤质量-植物病原微生物的定量检测》

检测设备

1.OlympusBX53显微镜:配备DP27相机(分辨率20481536),用于菌丝形态观测

2.Bio-RadT100PCR仪:支持梯度PCR(温度精度0.1℃),用于靶标基因扩增

3.ThermoScientificHeratherm培养箱:温度均匀性0.5℃,用于病原菌培养

4.Eppendorf5424R离心机:最大转速15,300rpm,用于DNA提取纯化

5.SartoriusQuintix224-1CN分析天平:精度0.1mg,用于培养基配制

6.MiltenyiBiotecGentleMACS组织破碎仪:程序化裂解植物样本

7.QiagenRotor-GeneQ实时荧光定量PCR仪:支持多通道荧光检测

8.MemmertIPP110培养箱:CO₂浓度控制精度0.1%,用于特殊培养条件

9.LeicaCM1950冷冻切片机:切片厚度精度1μm,用于组织病理学观察

10.ThermoNanoDropOne超微量分光光度计:测量DNA浓度(灵敏度2ng/μL)