检测项目

1.病毒粒子形态观察：透射电镜观测直径28-32nm的二十面体结构

2.外壳蛋白基因序列分析：靶向ORF3区域进行RT-PCR扩增（引物CP-F:5'-ATGGCGATCC-3'；CP-R:5'-TCACTCGAGTT-3'）

3.血清学检测：采用双抗体夹心ELISA法测定OD450值≥0.35为阳性阈值

4.寄主范围测试：接种12科36种植物观察系统花叶症状

5.抗性基因筛查：基于SNP标记PsRSV-R1的KASP分型检测

检测范围

1.牡丹植株活体样本（叶片/茎秆/根系）

2.繁殖材料（种子/插条/嫁接芽）

3.栽培基质及周边土壤样本

4.进出口检疫用干燥标本

5.组培苗脱毒验证材料

检测方法

1.ISO16140-6:2019《分子生物学方法验证规范》病毒核酸提取流程

2.GB/T28068-2011《花卉病毒检疫鉴定方法》症状分级标准

3.ASTMD3086-2020《植物病毒ELISA检测通用规程》

4.GB/T3543.5-1995《农作物种子检验规程》带毒率测定

5.OEPP/EPPOPM7/89(2)国际植保组织认证的DAS-ELISA方案

检测设备

1.JEM-1400Flash透射电子显微镜（120kV加速电压，0.38nm晶格分辨率）

2.ABI7500实时荧光定量PCR仪（TaqMan探针法，温度精度0.1℃）

3.BioTekELx808酶标仪（四波长滤光片系统，OD值测量误差≤1%）

4.ThermoNanodropOne超微量分光光度计（核酸浓度检测范围2-27,500ng/μL）

5.LeicaCM1950冰冻切片机（切片厚度1-100μm可调，温控范围-50℃至0℃）

6.EppendorfCentrifuge5430R高速离心机（最大转速30,000rpm，温控1℃）

7.MiltenyiBiotecgentleMACS组织研磨器（程序化裂解周期≤90秒）

8.Agilent4200TapeStation核酸分析系统（DNA/RNA完整性指数评估）

9.OlympusBX53荧光显微镜（汞灯光强可调式荧光成像系统）

10.MemmertIPP110培养箱（温度波动度0.3℃，CO₂浓度控制精度0.1%）