检测项目

1.病原菌形态学观察：菌丝直径（3-5μm）、分生孢子尺寸（12-184-6μm）、附着胞形态特征

2.孢子悬浮液浓度测定：标准浓度梯度（10^3-10^6spores/mL）定量分析

3.菌丝生长速率测定：PDA培养基25℃培养条件下日扩展量（2.5-3.8mm/d）

4.致病性验证：离体叶片接种后病斑直径（≥5mm/72h）判定标准

5.分子生物学鉴定：ITS序列比对（GenBank相似度≥99%）、特异性引物CapF/R扩增（产物大小268bp）

检测范围

1.柑桔叶片样本：包含初期煤污斑至晚期坏死斑不同发病阶段样本

2.果实表皮样本：重点采集果蒂部黑色霉层污染物

3.枝条样本：直径≤2cm的当年生枝条皮层组织

4.土壤基质：根际土壤中越冬病原菌载量检测

5.农用器具表面：修枝剪、嫁接刀等工具带菌量监测

检测方法

1.ISO16067:2018《植物病原真菌孢子采集与计数规范》

2.GB/T35818-2018《柑桔病害诊断技术规程》第7.3章烟煤病专项

3.ASTMD7993-15《植物病原真菌分子鉴定标准指南》

4.NY/T2817-2015《农作物病害标本采集与制作技术规范》

5.GB/T28076-2011《植物病原物实时荧光PCR检测方法》

检测设备

1.奥林巴斯BX53生物显微镜：配备DP27数码相机，实现400-1000病原形态观测

2.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪：支持TaqMan探针法分子鉴定

3.梅特勒XS205DU分析天平：精度0.01mg的孢子悬浮液称量

4.MemmertICP800培养箱：温度控制精度0.3℃的病原培养系统

5.BioTekEpoch2酶标仪：支持OD600值法测定孢子浓度

6.LeicaCM1950冰冻切片机：制备10μm厚度的组织病理切片

7.EppendorfCentrifuge5430R：最大转速15,000rpm的孢子离心富集系统

8.EscoAC2-4S1生物安全柜：达到WHOII级标准的无菌操作平台

9.SartoriusMilli-QIQ7000超纯水系统：制备分子生物学级实验用水

10.ZeissStemi508体视显微镜：20-50宏观病征观测系统