检测项目

1.超螺旋结构比例测定：琼脂糖凝胶电泳法测定超螺旋占比（≥85%），毛细管电泳法分辨率达1.5%

2.质粒浓度定量：紫外分光光度法（A260/A280比值1.75-1.85），荧光定量法灵敏度0.1ng/μL

3.宿主DNA残留检测：qPCR法定量分析（阈值≤1ng/mg质粒），探针灵敏度达10copies/μL

4.内毒素水平测试：鲎试剂动态显色法（限值＜10EU/mg），检测范围0.001-100EU/mL

5.质粒稳定性验证：加速稳定性试验（40℃/75%RH条件下14天降解率＜5%）

检测范围

1.基因治疗产品用质粒：包括AAV载体构建用质粒、CAR-T细胞治疗用转座子系统

2.mRNA疫苗生产用模板质粒：含T7/T3启动子的线性化质粒原料

3.重组蛋白表达系统：大肠杆菌表达载体（如pET系列）、哺乳动物表达载体（如pcDNA3.1）

4.体外诊断试剂盒组分：PCR扩增用阳性对照质粒、CRISPR检测用gRNA载体

5.科研级质粒库：全基因组文库载体、定点突变重组质粒等

检测方法

ASTME2963-15《质粒DNA超螺旋含量测定标准指南》规定电泳分析法

ISO21527-2:2008《生物技术-质粒纯度评估规范》规范宿主蛋白残留检测

GB/T34799-2017《核酸定量测定-吸光值法》规定A260/A280比值标准

GB/T37873-2019《生物制品宿主残留DNA测定法》明确qPCR技术参数

USP<1131>《基因治疗产品特性分析》规定内毒素控制标准

检测设备

Agilent2100生物分析仪：芯片电泳系统（DNA灵敏度0.5ng/μL）用于完整性分析

ThermoScientificNanoDropOne：微量分光光度计（波长范围190-850nm）快速浓度测定

Bio-RadQX200微滴式数字PCR仪：绝对定量宿主残留DNA（检出限0.001%）

LonzaEndosafeNexgen-PTS：动态显色法内毒素检测仪（15分钟完成测试）

BeckmanCoulterPA800Plus：高分辨率毛细管电泳系统（电压范围0-30kV）

EppendorfBioSpectrometerbasic：核酸定量专用分光光度计（路径长度0.2mm）

SartoriusCubisII半微量天平：称量精度0.01mg（符合ISO17025标准）

ThermoHeraeusCytomat2C培养箱：温度均一性0.5℃的稳定性试验设备